ATCC貨號(hào)：HTB-9

5637(膀胱癌細(xì)胞供應(yīng))的典型生長(zhǎng)模式圖。此半對(duì)數(shù)圖顯示了細(xì)胞密度與培養(yǎng)時(shí)間之間的關(guān)系。培養(yǎng)的細(xì)胞通常按照標(biāo)準(zhǔn)生長(zhǎng)模式增殖。細(xì)胞接種后 個(gè)生長(zhǎng)階段是延滯期，此階段細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，處于適應(yīng)培養(yǎng)環(huán)境、為快速生長(zhǎng)做準(zhǔn)備的狀態(tài)。延滯期之后是對(duì)數(shù)期，此階段細(xì)胞呈指數(shù)增殖，消耗生長(zhǎng)培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)素。當(dāng)所有生長(zhǎng)培養(yǎng)基均被耗盡 (即：一種或多種營(yíng)養(yǎng)素耗竭) 或者細(xì)胞已占據(jù)所有可用基質(zhì)時(shí)，細(xì)胞即進(jìn)入靜止期 (即：平臺(tái)期)，其增殖速度大大降低甚至完全停止。

5637(膀胱癌細(xì)胞供應(yīng))成纖維細(xì)胞  (或者成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞)  為雙極或多極細(xì)胞，呈細(xì)長(zhǎng)形，貼附在基質(zhì)上生長(zhǎng)。

5637(膀胱癌細(xì)胞供應(yīng))下列建議僅為實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)范的指導(dǎo)原則，不應(yīng)將其視為完整的工作準(zhǔn)則。請(qǐng)咨詢您所 在機(jī)構(gòu)的安全委員會(huì)，遵守當(dāng)?shù)赜嘘P(guān)實(shí)驗(yàn)室安全的規(guī)章制度。

有關(guān)微生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范的更多信息以及具體生物安全等級(jí)指導(dǎo)原則，請(qǐng)參閱《微生物和 生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全》第五版

? 必須始終穿戴適當(dāng)?shù)膫€(gè)人防護(hù)設(shè)備。手套污染時(shí)應(yīng)更換，將用過(guò)的手套與其他污染的

實(shí)驗(yàn)室廢物一起處置。

?   操作可能具有危害的物質(zhì)后以及離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室前應(yīng)洗手。

?   在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不得進(jìn)食、飲水、吸煙、處理隱形眼鏡、涂抹化妝品或者存放供人食用的

食物。

?   遵守所在機(jī)構(gòu)關(guān)于銳器(即：針頭、手術(shù)刀、吸管和破裂的玻璃器皿)安全操作的準(zhǔn)則。

?   小心操作，盡量避免形成氣體揮發(fā)和/或潑濺。

?   實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前、結(jié)束后以及可能具有傳染性的物質(zhì)發(fā)生潑濺時(shí)，應(yīng)立即使用適當(dāng)?shù)娜ノ蹌?duì)所有工作臺(tái)面進(jìn)行去污。無(wú)論實(shí)驗(yàn)室設(shè)備是否被污染，均應(yīng)定期進(jìn)行清潔。

?   在對(duì)可能具有傳染性的物質(zhì)進(jìn)行處置前應(yīng)先去除污染。

?   發(fā)生事故可能導(dǎo)致感染性物質(zhì)暴露時(shí)，應(yīng)向相應(yīng)人員  (例如：實(shí)驗(yàn)室主管、安全員) 報(bào)告。

5637(膀胱癌細(xì)胞供應(yīng))無(wú)菌技術(shù)

細(xì)胞培養(yǎng)的成功很大程度上取決于保護(hù)細(xì)胞免受細(xì)菌、真菌和病毒等微生物的污染。非無(wú)菌物品、培養(yǎng)基和試劑、帶有微生物的空氣顆粒、不干凈的培養(yǎng)箱和污染的工作臺(tái)面均是導(dǎo)致微生物污染的來(lái)源。

無(wú)菌技術(shù)的作用是在環(huán)境微生物與無(wú)菌的細(xì)胞培養(yǎng)物之間形成一道屏障，它通過(guò)一套操作流程來(lái)降低培養(yǎng)物被上述污染源污染的可能。無(wú)菌技術(shù)的組成要素包括：無(wú)菌工作區(qū)域、良好的個(gè)人衛(wèi)生、無(wú)菌試劑和培養(yǎng)基以及無(wú)菌操作。

無(wú)菌工作區(qū)域

最為簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)的減少空氣顆粒和氣體揮發(fā)  (例如：灰塵、芽孢、皮屑、噴嚏)  污染的方法就是采用細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥。

?   細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥應(yīng)正確設(shè)置，放置于專門(mén)用于細(xì)胞培養(yǎng)的區(qū)域，同時(shí)要避免來(lái)自門(mén)、窗及其他設(shè)備的氣流，不能有直接的來(lái)往通道。

?   工作臺(tái)面應(yīng)保持整潔，只放置特定實(shí)驗(yàn)所需的物品；不能用作儲(chǔ)存區(qū)域。

?   使用前后均應(yīng) 消毒工作臺(tái)面，周圍區(qū)域和設(shè)備應(yīng)定期清潔。

?   常規(guī)清潔時(shí)，工作前和工作過(guò)程中，特別是發(fā)生潑濺后，應(yīng)使用 70% 乙醇擦拭工作臺(tái)面。

?   使用完畢后，可用紫外燈對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥內(nèi)空氣和暴露在外的工作臺(tái)面進(jìn)行消毒。

?   在細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥內(nèi)不需要也不建議使用煤氣燈火焰。

? 細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥應(yīng)始終保持運(yùn)轉(zhuǎn)，長(zhǎng)時(shí)間不使用時(shí)方可關(guān)閉。

病毒

病毒是一種微觀感染性物質(zhì)，利用宿主細(xì)胞結(jié)構(gòu)進(jìn)行復(fù)制。病毒體積極小，因而要檢測(cè)培養(yǎng)物中有無(wú)病毒以及將其從細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室所用試劑中去除都十分困難。由于大多數(shù)病毒對(duì)宿主有非常嚴(yán)格的要求，因此一般不會(huì)對(duì)與其宿主物種不同的細(xì)胞培養(yǎng)物造成不良影響。但是，使用病毒感染的細(xì)胞培養(yǎng)物時(shí)卻會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)室工作人員造成嚴(yán)重的健康威脅，特別是當(dāng)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的是人或靈長(zhǎng)類動(dòng)物細(xì)胞時(shí)。通過(guò)電子顯微鏡檢查、一組抗體的免疫染色、ELISA  實(shí)驗(yàn)或者采用適當(dāng)病毒引物的 PCR 技術(shù)可以檢測(cè)出細(xì)胞培養(yǎng)物的病毒污染。

支原體

支原體是一種沒(méi)有細(xì)胞壁的簡(jiǎn)單細(xì)菌，被認(rèn)為是能夠自我復(fù)制的最小的生物。由于體積極小(一般小于 1 微米)，支原體的檢測(cè)十分困難，除非其達(dá)到極高的密度，導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)物變質(zhì)，在此之前往往沒(méi)有明顯的感染征象。有些生長(zhǎng)緩慢的支原體可能會(huì)在培養(yǎng)物中持續(xù)存在，而不會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡，但是這些支原體會(huì)改變培養(yǎng)體系中宿主細(xì)胞的行為和代謝。慢性支原體感染的可能表現(xiàn)包括：細(xì)胞增殖速度降低、飽和密度下降以及懸浮培養(yǎng)物凝集；但是，*切實(shí)有效的檢測(cè)支原體污染的方法就是采用熒光染色  (例如：Hoechst 33258)、ELISA、PCR、免疫染色、放射自顯影或者微生物學(xué)測(cè)定技術(shù)定期檢測(cè)培養(yǎng)物。

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