PCR實驗方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產物不斷積累，熒光信號也會相應的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應進行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務：

簡介：實時熒光定量PCR技術于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉錄成cDNA。

（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結果分析。

（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標準：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

以下是公司正在熱銷產品產品：

fLinagliptin  668270-12-0  中文名：利拉利汀  分子式：C25H28N8O2  度：98.0%      小鼠特異生長因子elisa試劑盒   小鼠特異生長因子試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠特異生長因子試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠特異生長因子試劑盒、小鼠特異生長因子elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

Lidocaine hydrochloride  73-78-9  中文名：鹽酸利多卡因  分子式：C14H23ClN2O  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠壞死因子elisa試劑盒   小鼠壞死因子試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠壞死因子試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠壞死因子試劑盒、小鼠壞死因子elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

Lidocaine  137-58-6  中文名：利多卡因  分子式：C14H22N2O  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠總補體elisa試劑盒   小鼠總補體試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠總補體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠總補體試劑盒、小鼠總補體elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

Levodopa  59-92-7  中文名：左旋多巴  分子式：C9H11NO4  度：98.0%      小鼠總腺原酸elisa試劑盒   小鼠總腺原酸試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠總腺原酸試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠總腺原酸試劑盒、小鼠總腺原酸elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  

Levamisole hydrochloride  16595-80-5  中文名：鹽酸左旋咪唑  分子式：C11H13ClN2S  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠特異生長因子/相關因子(TSGF)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠腦腸肽elisa試劑盒   小鼠腦腸肽試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠腦腸肽試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠腦腸肽試劑盒、小鼠腦腸肽elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  Fingolimod hydrochloride  162359-56-0  中文名：鹽酸芬戈莫德  分子式：C19H34ClNO2  度：98.0%  關鍵詞： 

小鼠腦腸肽(BGP/Gehrelin)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Cortisone acetate  1950/4/4  中文名：醋酸可的松  分子式：C23H30O6 

小鼠末端補體復合物C5b-9(TCCC5b-9)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Fexofenadine hydrochloride  中文名：鹽酸非索非那定  分子式：C32H40ClNO4  度：98.0%

小鼠膜聯(lián)蛋白elisa試劑盒   小鼠膜聯(lián)蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠膜聯(lián)蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠膜聯(lián)蛋白試劑盒、小鼠膜聯(lián)蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。     Chimaphilin  中文名：梅笠草素  分子式：C12H10O2 

小鼠膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Fenticonazole nitrate  中文名：硝酸芬替康唑  分子式：C24H21Cl2N3O4S  度：98.0%Chrysophanol  481-74-3  中文名：大黃酚  分子式：C15H10O4    Humandopaminedecarboxylase,DDCELISA試劑盒人多巴胺脫羧酶(DDC)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Chrysophanol 8-O-glucoside  13241-28-6  中文名：  分子式：C21H20O9    組織NEK6激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

Rubanthrone A  441764-20-1  中文名：  分子式：C17H14O10    HumanphosphoProteinKinaseC,P-PKCELISAKit人0酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Aloin  8015-61-0  中文名：蘆薈苷  分子式：C21H22O9    兔子內皮抑素(ES)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Aurantio-obtusin  67979-25-3  中文名：橙黃決明素  分子式：C17H14O7    People leils binding type AFP / AFP varia 1 (AFP-L1) ELISA kit E 人小扁結合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質體1(AFP-L1)ELISA試劑盒E

流行性造血器官壞死病毒探針法熒光定量PCR試劑盒說明書Tanshinone IIB  17397-93-2  中文名：丹參酮IIB  分子式：C19H18O4  度：97.0%  關鍵詞：  神經保護; 抗氧化; 丹參; 鼠尾草屬; 二萜醌; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫  小鼠胰島素原(PI)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Tanshinone IIA  568-72-9  中文名：丹參酮IIA  分子式：C19H18O3  度：98.5%  關鍵詞：  抗腫瘤; 抗癌; 丹參; 二萜醌; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫  小鼠胰島素樣生長因子結合蛋白4(IGFBP-4)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Tanshinone I  568-73-0  中文名：  分子式：C18H12O3  度：96.0%  關鍵詞：  抗腫瘤; 抗癌; 鼠尾草屬; 二萜醌; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫  小鼠胰島素樣生長因子結合蛋白6(IGFBP-6)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Sunitinib malate  341031-54-7  中文名：蘋果酸舒尼替尼  分子式：C26H33FN4O7  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠巨噬細胞炎性蛋白1δ(MIP-1δ/CCL15)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Sulfaquinoxaline  59-40-5  中文名：磺胺喹噁啉  分子式：C14H12N4O2S  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠肺部活化調節(jié)趨化因子(PARC/CCL18)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事項：

流行性造血器官壞死病毒探針法熒光定量PCR試劑盒說明書1．基礎程序；

2．擴增溫度和延伸溫度；

3．反應時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應液的配制；

6．PCR技術的基本原理；

7．PCR的反應動力學；

8．PCR擴增產物；

9．PCR反應體系與反應條件。點擊了解更公司產品。