上海滬崢專業(yè)生產(chǎn)銷售禽呼腸孤病毒一步法RT-PCR診斷試劑盒現(xiàn)貨，我公司供應(yīng)的分子生物學(xué)試劑品類齊全，且具有優(yōu)勢(shì)價(jià)格，歡迎新老客戶咨詢認(rèn)購。

產(chǎn)品詳細(xì)信息

名稱：禽呼腸孤病毒一步法RT-PCR診斷試劑盒

規(guī)格： 20T/50T

品牌：上海滬崢

【用途】 用于禽呼腸孤病毒的檢測(cè)、診斷和流行病學(xué)調(diào)查。

【操作步驟】

1.RNA提取 

(1) 取疑似病料（關(guān)節(jié)組織、雞胚尿囊液等）1~4g于無菌研缽，研磨并用PBS液（pH7.2~7.4）稀釋成1：4乳劑，分裝1.5ml滅菌EP管，反復(fù)凍融2~3次，8000r/min離心5分鐘。（病毒培養(yǎng)液，只需凍融1次即可8000r/min離心5分鐘）

（2）取200uL上清液（或標(biāo)準(zhǔn)品Ｔ），移入新的1.5mL滅菌EP管中，加入200uLSR-I，漩渦振蕩混合均勻，靜置5min。

（3）加75uL TU-1，漩渦振蕩混合均勻，10000r/min離心5 min。

（4）將上清轉(zhuǎn)移到新的2 ml離心管（試劑盒內(nèi)提供）中，加入300 uL 異丙醇（1%冰乙酸），上下倒置6-8次，混合均勻。

（5）將步驟4中的混合液移入制備管中，并將制備管置于同一2 ml離心管，10000 r/min離心1min。

（6）棄濾液，將制備管置回到2 ml離心管中，加500 uL SR-II，室溫靜置1min，10000 r/min離心1 min。

（7）棄濾液，將制備管置回到2 ml離心管中，加700 uL SR-Ⅲ，10000 r/min離心1 min。

（8）將制備管置回到2 ml離心管中，10000 r/min離心1 min。

（9） 將制備管置于潔凈的1.5 ml離心管中（試劑盒內(nèi)提供），在制備管膜中央加40 uL TU-2， 室溫靜置1 min。10000 r/min離心1 min洗脫。洗脫液即為模板，即用或-70℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

 3 .PCR操作 

4.電泳

配制1%瓊脂糖凝膠，取PCR產(chǎn)物5uL混合1uL TU-8，加樣于凝膠孔中，同時(shí)在相鄰孔加3uLTU-7，在120v 電壓下，1×TAE液中電泳15分鐘，在紫外成像儀下觀察結(jié)果。

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【結(jié)果判定】如果為禽呼腸孤病毒感染陽性，則有約297bp目的條帶，如果為禽呼腸孤病毒感染陰性，則無目的條帶。

1.       陰性對(duì)照；

2.       陽性擴(kuò)增；

3.       DL2000

【注意事項(xiàng)】

1. 每次使用，開蓋之前請(qǐng)先瞬時(shí)離心，使試劑沉于管底。

2. 所有試劑在要求溫度下保存，-20℃保存試劑盡量減少反復(fù)凍融，使用后的試劑立即放回，避免在室溫?cái)R置太久。

3. 盡量建立PCR試驗(yàn)操作區(qū)，避免交叉污染。

4. 加樣和反應(yīng)程序嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，由于操作失誤、移液器不精確、定時(shí)不準(zhǔn)確造成無結(jié)果情況，不予負(fù)責(zé)。

5. 吸頭、離心管和PCR管在使用前，要高壓滅菌，操作過程盡量不要用手接觸到管內(nèi)壁，可用鑷子夾取。

6. 注意防止試劑污染，在有效期限前用完。

1. 將qPCR試劑盒解凍，理想溫度為5℃(±3℃)，置于冷凍架上。在室溫21℃(±5℃)下解凍，但必須在解凍后立即使用。




2. 準(zhǔn)備qPCR預(yù)混料(PCR管)。




3. 在qPCR預(yù)混料(PCR管)中分別加入以下物質(zhì)：




①5μl陰性質(zhì)控(DW)；②5μl樣本提取的DNA；③5μl陽性質(zhì)控DNA (PC)。




4. 輕輕混合，離心片刻。




5. 用PCR儀對(duì)樣品進(jìn)行PCR反應(yīng)。