準(zhǔn)備物品：

清理液（A）                                   毫升

染色液（t B）                                   微升

稀釋液（C）                                   毫升

溶解液（tD）                                   毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)                                   1份

普通PCR反應(yīng)流程：

組成及試劑配制:

1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）

2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)謩e配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。

3、 樣品稀釋液：1×20ml。

4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。

5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。

反應(yīng)五要素：

蜂房小甲蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：

①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。

③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。

引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

使用方法 ：   

1 實(shí)驗(yàn)所需器材與試劑

1.1 器材

1）PCR儀

2）PCR反應(yīng)管

3）電泳儀及水平電泳槽

4）高速離心機(jī)

5）微量移液器及移液器吸頭

1.2 試劑

1）瓊脂糖

2）EB（溴化乙錠）

3）去離子水或雙蒸水

注意事項(xiàng)：   

5.1使用本試劑前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本說(shuō)明書(shū)全文。

5.2 操作時(shí)應(yīng)盡量少說(shuō)話，因口腔中也含有支原體，可能引起樣品污染，而造成假陽(yáng)性；整個(gè)檢測(cè)過(guò)程中，反應(yīng)體系的配制、樣本處理及加樣、PCR擴(kuò)增應(yīng)分區(qū)域進(jìn)行，以避免交叉污染。 5.3 實(shí)驗(yàn)時(shí)，試劑盒組分中的試劑使用前應(yīng)充分融化并混勻（混勻時(shí)禁止激烈振蕩，只需要進(jìn)行上下倒置多次進(jìn)行混勻）。

5.4 反應(yīng)管中加好所有的試劑后，應(yīng)盡快上PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增，以免形成過(guò)多的二聚體。

5.5細(xì)胞培養(yǎng)物中含有青霉素和鏈霉素等抗生物素不會(huì)影響本品的檢測(cè)結(jié)果。如果用戶(hù)需要進(jìn)一步提高檢測(cè)靈敏度，建議細(xì)胞在不含青霉素和鏈霉鏈等抗生素中進(jìn)行培養(yǎng)2-3天后送樣檢測(cè)。

現(xiàn)貨促銷(xiāo) 甘草酸單銨鹽 規(guī)格: FastStart High Fidelity PCR System 2,500 U(up to 5 kb)

現(xiàn)貨促銷(xiāo) 橄欖苦苷 規(guī)格: Taq DNA Polymerase (1u/ul)dNTP

現(xiàn)貨促銷(xiāo) 高車(chē)前苷Proteinase K,recomb.,PCR Grd.l

現(xiàn)貨促銷(xiāo) 高車(chē)前素 規(guī)格: FastStart Taq DNA Polymerase,

現(xiàn)貨促銷(xiāo) 高烏甲素 規(guī)格: Rapid DNA Ligation Kit

現(xiàn)貨促銷(xiāo) 藁本內(nèi)酯 規(guī)格: Dig-RNA labeling kit 1St

現(xiàn)貨促銷(xiāo) 根皮苷 規(guī)格: FastStart Taq DNA Polymerase,

現(xiàn)貨促銷(xiāo) 根皮素 規(guī)格: DNase I recombinant, RNase-fre

現(xiàn)貨促銷(xiāo) 鉤藤堿 規(guī)格: Expand Long Templ.PCR Syst. （ 5 to 20 kb）

現(xiàn)貨促銷(xiāo) 鉤吻素子 規(guī)格: Proteinase K,recomb.,PCR Grd.S

現(xiàn)貨促銷(xiāo) 枸橘苷 規(guī)格: FastStart PCR Master 10 ml

現(xiàn)貨促銷(xiāo) 枸櫞酸血根堿 規(guī)格: ExpandTM Reverse Transcriptase

現(xiàn)貨促銷(xiāo) 光甘草定 規(guī)格: DIG DNA Labeling Kit

現(xiàn)貨促銷(xiāo) 桂皮醛Expand High FidelityPLUS PCR System, dNTPack（up to 5 kb）

現(xiàn)貨促銷(xiāo) 桂皮酸,肉桂酸RNase, 500 mg

現(xiàn)貨促銷(xiāo) 漢防己甲素 規(guī)格: DNase I rec., grade I 20KU
蜂房小甲蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒小鼠e抗原(HBeAg)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CCL26(Eotaxin 3 25G

小鼠e抗體(HBeAb)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CCL4/MIP-1 Beta(Macrophage Inflammatory Protein 1 beta 500G

小鼠乙酰膽堿受體抗體(AChRab)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CCL5/RANTES(regulated on activation normal T cell expressed and secreted 500G

小鼠乙酰膽堿(ACH)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CCP peptide (cyclic citrullinated peptide,CCP 25G

小鼠胰素樣肽1(GLP-1)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CCP peptide (cyclic citrullinated peptide,CCP 500G

小鼠胰淀素(Amylin)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CCR-1(CC chemokine receptor 1 25G

小鼠胰島細(xì)胞抗體(ICA)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CCR-2/5(CC chemokine receptor 2/5 500ML

小鼠自身抗體(IAA)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CCR-2A(C-C Chemokine receptor 2A 1G