上海一研生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品: 生化試劑 ELISA試劑盒, 檢測(cè)試劑盒, 免疫組化試劑盒, 分子生物學(xué)試劑盒
查菲埃立克體PCR檢測(cè)試劑盒
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上海市閔行區(qū)
主營(yíng)產(chǎn)品
反應(yīng)五要素:
查菲埃立克體PCR檢測(cè)試劑盒參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
準(zhǔn)備物品:
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1份
產(chǎn)品名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 規(guī)格 |
查菲埃立克體PCR檢測(cè)試劑盒 | Ehrlichia chaffeensisPCR | 50T |
普通PCR反應(yīng)流程:
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)謩e配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
使用方法 :
1 實(shí)驗(yàn)所需器材與試劑
1.1 器材
1)PCR儀
2)PCR反應(yīng)管
3)電泳儀及水平電泳槽
4)高速離心機(jī)
5)微量移液器及移液器吸頭
1.2 試劑
1)瓊脂糖
2)EB(溴化乙錠)
3)去離子水或雙蒸水
注意事項(xiàng):
5.1使用本試劑前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本說(shuō)明書(shū)全文。
5.2 操作時(shí)應(yīng)盡量少說(shuō)話(huà),因口腔中也含有支原體,可能引起樣品污染,而造成假陽(yáng)性;整個(gè)檢測(cè)過(guò)程中,反應(yīng)體系的配制、樣本處理及加樣、PCR擴(kuò)增應(yīng)分區(qū)域進(jìn)行,以避免交叉污染。 5.3 實(shí)驗(yàn)時(shí),試劑盒組分中的試劑使用前應(yīng)充分融化并混勻(混勻時(shí)禁止激烈振蕩,只需要進(jìn)行上下倒置多次進(jìn)行混勻)。
5.4 反應(yīng)管中加好所有的試劑后,應(yīng)盡快上PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增,以免形成過(guò)多的二聚體。
5.5細(xì)胞培養(yǎng)物中含有青霉素和鏈霉素等抗生物素不會(huì)影響本品的檢測(cè)結(jié)果。如果用戶(hù)需要進(jìn)一步提高檢測(cè)靈敏度,建議細(xì)胞在不含青霉素和鏈霉鏈等抗生素中進(jìn)行培養(yǎng)2-3天后送樣檢測(cè)。
萘磺左丙氧芬標(biāo)準(zhǔn)品 現(xiàn)貨促銷(xiāo) 規(guī)格: 55550-7 Pirbuterol Acetate (AS)
左啡諾標(biāo)準(zhǔn)品 現(xiàn)貨促銷(xiāo) 規(guī)格: 5985-38-6 Piperidolate Hydrochloride
左旋甲狀腺素標(biāo)準(zhǔn)品 現(xiàn)貨促銷(xiāo) 規(guī)格: 51-48-9 Piperazine Phosphate
左旋甲狀腺素標(biāo)準(zhǔn)品(峰值定性用) 現(xiàn)貨促銷(xiāo) 規(guī)格: Piperazine Dihydrochloride
利多卡因標(biāo)準(zhǔn)品 現(xiàn)貨促銷(xiāo) 規(guī)格: 137-58-6 Piperazine Citrate
鹽林可霉素標(biāo)準(zhǔn)品 現(xiàn)貨促銷(xiāo) 規(guī)格: 7179-49-9 Piperazine Adipate
標(biāo)準(zhǔn)品 現(xiàn)貨促銷(xiāo) 規(guī)格: 58Piperazine
亞油酯酰聚氧甘油酯標(biāo)準(zhǔn)品 現(xiàn)貨促銷(xiāo) 規(guī)格: Piperacillin
碘噻羅寧標(biāo)準(zhǔn)品 現(xiàn)貨促銷(xiāo) 規(guī)格: 1823692Piperacetazine
α-硫辛標(biāo)準(zhǔn)品 現(xiàn)貨促銷(xiāo) 規(guī)格: 1077-28-7 Pioglitazone Hydrochloride
賴(lài)諾普利標(biāo)準(zhǔn)品 現(xiàn)貨促銷(xiāo) 規(guī)格: 83915-83-7 Pindolol
賴(lài)諾普利相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 現(xiàn)貨促銷(xiāo) 規(guī)格: 328385-86-0 Pimozide
碳鋰標(biāo)準(zhǔn)品 現(xiàn)貨促銷(xiāo) 規(guī)格: 554-13-2 Pilocarpine Hydrochloride
鹽洛哌丁胺標(biāo)準(zhǔn)品 現(xiàn)貨促銷(xiāo) 規(guī)格: 34552-83-5 Pilocarpine
洛匹那韋標(biāo)準(zhǔn)品 現(xiàn)貨促銷(xiāo) 規(guī)格: 192725-17-0 Phytonadione (Vitamin K1)
洛匹那韋系統(tǒng)適配物標(biāo)準(zhǔn)品 現(xiàn)貨促銷(xiāo) 規(guī)格: Physostigmine Salicylate
查菲埃立克體PCR檢測(cè)試劑盒大鼠骨保護(hù)素配體(OPGL)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Mefenamic Acid 2.5ml
大鼠骨保護(hù)素(OPG)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Medrysone 100mg
大鼠谷氨脫羧酶自身抗體(GAD-Ab)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Medroxyprogesterone Acetate 1g
大鼠孤腓肽(OFQ/N)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Meclofenamate Sodium 100mg
大鼠鉤端螺旋體IgG(Lep IgG)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) Meclocycline Sulfosalicylate 10mg
大鼠睪酮(T)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Meclizine Hydrochloride 100mg
大鼠高鐵血紅蛋白(MHB)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) Mecamylamine Hydrochloride 1g
大鼠高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Mebrofenin 3 x 10mg