山東富舜新材料科技有限公司座落在美麗的“泉城”濟(jì)南。公司是集化學(xué)科研、開發(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務(wù)為一體的綜合型企業(yè)。我公司擁有先進(jìn)的生產(chǎn)設(shè)備，完善的產(chǎn)品檢測手段和質(zhì)量保證體系。我公司的員工具有較強(qiáng)的責(zé)任感。經(jīng)過多年的發(fā)展，現(xiàn)已形成添加劑、阻燃劑、和化工助劑三大類上百個品種。公司本著“誠信經(jīng)營、專注品質(zhì)”的宗旨，參與到激烈的市場競爭中來，以好的產(chǎn)品質(zhì)量，優(yōu)惠的產(chǎn)品價格，令人滿意的銷售服務(wù)，贏得大家的支持與信賴。山東富舜新材料科技有限公司的誠信、實(shí)力和產(chǎn)品質(zhì)量獲得業(yè)界的認(rèn)可。歡迎各界朋友蒞臨參觀、指導(dǎo)和業(yè)務(wù)洽談。

考馬斯亮藍(lán)法測定蛋白質(zhì)含量流程：

該方法用于大多數(shù)蛋白質(zhì)的定量是比較精que的，但不適用于小分子堿性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污劑的濃度超過0．2%影響測定結(jié)果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。

1．Bradford濃染液的配制：將100mg考馬斯亮藍(lán)G-250溶于50ml 95%乙醇，加入100ml85%的磷酸，然后，用蒸餾水補(bǔ)充至1000ml，此染液放4℃至少6個月保持穩(wěn)定。

2．標(biāo)準(zhǔn)曲線蛋白質(zhì)樣本的準(zhǔn)備：盡量使用與待測樣本性質(zhì)相近的蛋白質(zhì)作為標(biāo)準(zhǔn)品，例如測定抗ti，可用純化的抗ti作為標(biāo)準(zhǔn)。如果待測樣本是未知的，也可用抗ti作為標(biāo)準(zhǔn)蛋白。通常在20ug—150ug/100ul之間繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3．將待測樣本溶于緩沖溶液中，該緩沖溶液應(yīng)與制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的緩沖溶液相同(最hao用PBS)。

4．按1：5用蒸餾水稀釋濃染料結(jié)合溶液，如出現(xiàn)沉淀，過濾除去。

5．每個樣本加5ml稀釋的染料結(jié)合溶液，作用5～30min。染液與蛋白質(zhì)結(jié)合后，將由紅色變?yōu)樗{(lán)色，在595nm波長下測定其吸光度。注意，顯色反應(yīng)不得超過30min．

6．根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測樣本的濃度。

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考馬斯亮藍(lán)G-250法測定蛋白質(zhì)含量的原理是什么

     在酸性條件下，考馬斯亮蘭G-250染料與蛋白質(zhì)疏水區(qū)結(jié)合，導(dǎo)致最da吸收峰由465 nm 變?yōu)?95 nm，同時顏色也由棕色變?yōu)樗{(lán)色,該藍(lán)色化合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度的高低成正比關(guān)系。將蛋白質(zhì)樣品或稀釋的BSA 與Bradford試劑混合，測量在595 nm處的吸收值，在建立由一系列稀釋的BSA建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線的情況下，蛋白質(zhì)的濃度可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線而確定。

    考馬斯亮藍(lán)G-250（Coomassie brilliant blue G-250）測定蛋白質(zhì)含量屬于染料結(jié)合法的一種。在游離狀態(tài)下呈紅色，最da光吸收在488nm；當(dāng)它與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)榍嗌?，蛋白質(zhì)-色素結(jié)合物在595nm波長下有最da光吸收。其光吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比，因此可用于蛋白質(zhì)的定量測定。蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍(lán)G-250結(jié)合在2min左右的時間內(nèi)達(dá)到平衡，完成反應(yīng)十分迅速；其結(jié)合物在室溫下1h內(nèi)保持穩(wěn)定。

    該法是1976年Bradford建立，試劑配制簡單，操作簡便快捷，反應(yīng)非常靈敏，靈敏度比Lowry法還高4倍，可測定微克級蛋白質(zhì)含量，測定蛋白質(zhì)濃度范圍為0～1 000μg/mL，最xaio可測2.5μg/mL蛋白質(zhì)，是一種常用的微量蛋白質(zhì)快速測定方法。

考馬斯亮藍(lán)有G250和R250兩種。其中考馬斯亮藍(lán)G250由于與蛋白質(zhì)的結(jié)合反應(yīng)十分迅速，常用來作為蛋白質(zhì)含量的測定?？捡R斯亮藍(lán)R250與蛋白質(zhì)反應(yīng)雖然比較緩慢，但是可以被洗脫下去，所以可以用來對電泳條帶染色。

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考馬斯亮藍(lán)染色 使用說明：

1. 常規(guī)染色脫色方法：

a. 電泳結(jié)束后，取凝膠放入適量考馬斯亮藍(lán)染色液中，確保染色液可以充分覆蓋凝膠。

  b. 置于水平搖床或側(cè)擺搖床上緩慢搖動，室溫染色1小時或更長時間。 注：具體的染色時間取決于凝膠的厚度和染色時的溫度。凝膠較厚，溫度較低，則染色時間宜適當(dāng)延長。凝膠較薄，溫度較高，則染色時間可以適當(dāng)縮短。通常染色至凝膠的顏色和染色液的顏色非常接近，在染色液中幾乎看不清凝膠時，可以認(rèn)為已染色充分。染色2-4個小時或更長時間不會對最終的染色效果產(chǎn)生fu面影響。

  c. 倒出染色液。染色液可以回收重復(fù)使用至少2-3次。 

d. 加入適量考馬斯亮藍(lán)染色脫色液，確保脫色液可以充分覆蓋凝膠。

e. 置于水平搖床或側(cè)擺搖床上緩慢搖動，室溫脫色4-24小時。期間更換脫色液2-4次，直至藍(lán)色背景基本上全部被脫去，并且蛋白條帶染色效果達(dá)到預(yù)期。通常蛋白條帶在脫色1-2小時后即可出現(xiàn)。 注：脫色期間可以在脫色液中加入一片吸水紙，可以使部分染料吸附在吸水紙上，加快脫色。脫色時間過長也會導(dǎo)致蛋白條帶的顏色變淺。

f． 完成脫色后，可以把凝膠保存在水中，用于后續(xù)的拍照等。保存在水中的凝膠會發(fā)生溶漲。如需避免溶漲，可以把膠保 存在含20%甘油的水中。長期保存可以制備干膠。

 2. 快速染色脫色方法：

  a. 電泳結(jié)束后，取膠放入適量考馬斯亮藍(lán)染色液中，微波爐加熱至接近沸騰或剛剛沸騰，立即停止加熱。通常對于膠濃度大于10％的膠比較堅(jiān)韌，在發(fā)生煮沸時不易破損；對于膠濃度小于10%的膠，宜盡量避免煮沸，以免出現(xiàn)膠碎裂的情況。

  b. 隨后在染色液溫度較高的情況下，在室溫?fù)u床上搖動5-10分鐘。

c. 倒出染色液。染色液可以回收重復(fù)使用至少2-3次。

d. 加入適量考馬斯亮藍(lán)染色脫色液，確保染色液可以充分覆蓋凝膠。

e. 微波爐加熱至接近沸騰或剛剛沸騰，立即停止加熱。

f. 隨后在脫色液溫度較高的情況下，在搖床上搖動5-10分鐘。此時通?？梢杂^察到比較清楚的蛋白條帶。

g. 更換新鮮的脫色液，重復(fù)步驟e和步驟f，直至藍(lán)色背景基本上全部被脫去，蛋白條帶染色效果達(dá)到預(yù)期。