產品名稱：人腫瘤壞死因子α（TNF-α）ELISA檢測試劑盒

英文名稱：Human Tumor necrosis factor α,TNF-α ELISA KIT 

產品規(guī)格：96T（人份）/48T（人份）（單孔檢測分別可以檢測90份樣本，42分樣本，一般都需要留6個孔做標準曲線）。

檢測方法：酶聯(lián)免疫分析ELISA方法

有效期： 6個月(4℃)；

保存方法： 2-8℃

品牌：子科生物ZIKER

質量保證：我告訴所有產品均需要經過質檢通過后，才允許出庫！

適用范圍：實驗結果僅供科研參考，不推薦用于臨床診斷結果。

ELISA常用的方法：雙抗體夾心法、間接法、競爭法以及BAS-ELISA等，子科生物ELISA產品主要用雙抗體夾心法。

標本：血清、血漿、細胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。

產品性能：靈敏度高，特異性強，重復性。

產品包裝：盒（KIT）（含試劑+酶聯(lián)板+覆膜等）

檢測范圍：詳細請咨詢在線客服或撥打銷售蘇經理。

人腫瘤壞死因子α（TNF-α）ELISA檢測試劑盒

試劑盒組成及試劑配制

1. 酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔）。

2. 標準品（Standard）：2瓶（凍干品）。

3. 樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。

4. 生物素標記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5. 辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

6. 生物素標記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

7. 辣根過氧化物酶標記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

9. 濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

10. 終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

實驗原理：

用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗該指標抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗該指標抗體、HRP標記的親和素，經過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。

標本的采集及保存

1. 血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過了夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

2.血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

3.細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

注：標本溶血會影響*檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

標本的稀釋原則：

首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標準曲線的范圍內，檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中，應做好詳細的記錄。*計算濃度時，稀釋了“N”倍，標本的濃度應再乘以“N”。

標準品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為300 pg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml，臨用前15分鐘內配制。

如配制150 pg/ml標準品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。

人腫瘤壞死因子α（TNF-α）ELISA檢測試劑盒操作步驟

實驗開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。

1. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。

為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制），37℃,60分鐘。

3. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同生物素標記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。

5. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。

結果判定：

子科生物所供ELISA試劑盒結果判定一般分定性測定和定量測定兩種：

1、定性測定

定性測定的結果判斷是對受檢標本中是否含有待測抗原或抗體作出"有"或"無"的簡單回答，分別用"陽性"、"陰性"表示。"陽性"表示該標本在該測定系統(tǒng)中有反應。"陰性"則為無反應。用定性判斷法也可得到半定量結果，即用滴度來表示反應的強度，其實質仍是一個定性試驗。在這種半定量測定中，將標本作一系列稀釋后進行試驗，呈陽性反應的*稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低，可以判斷標本反應性的強弱，這比觀察不稀釋標本呈色的深淺判斷為強陽性、弱陽性更具定量意義。

2、定量測定

ELSIA操作步驟復雜，影響反應因素較多，特別是固相載體的包被難達到各個體之間的一致，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標準品在相同的條件下制作標準曲線。測定大分子量物質的夾心法ELISA，標準曲線的范圍一般較寬，曲線*點的吸光度可接近2.0，繪制時常用半對數(shù)紙，以檢測物的濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標，將各濃度的值逐點連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，中央較呈直線的部分是最理想的檢測區(qū)域。

測定小分子量物質常用競爭其標準曲線中吸光度與受檢物質的濃度呈負相關。標準曲線的形狀因試劑盒所用模式的差別而略有不同。ELISA測定的標準曲線示例見圖注意圖中橫坐標為對數(shù)關系，這更有利于測定系統(tǒng)的表達。

人腫瘤壞死因子α（TNF-α）ELISA檢測試劑盒

ZK-H574人苯丙氨酸羥化酶(PAH)ELISA檢測試劑盒human Phenylalanine Hydroxylase (PAH) ELISA Kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H575人異亮氨酰tRNA合成酶(IARS)ELISA檢測試劑盒human Isoleucyl tRNA Synthetase (IARS) ELISA Kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H576人S-期激酶關聯(lián)蛋白1(SKP1)ELISA檢測試劑盒human S-Phase Kinase Associated Protein 1 (SKP1) ELISA Kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H577人細胞間粘附分子1（ICAM-1/CD54）ELISA檢測試劑盒Human intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1 ELISA Kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H578人脂聯(lián)素（ADP）ELISA檢測試劑盒Human adiponectin,ADP ELISA Kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H579人脂氧素A4（LXA4）ELISA檢測試劑盒Human Lipoxin A4,LXA4 ELISA Kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H580人組織相容性復合體Ⅰ類相關基因A（MICA）ELISA檢測試劑盒Human MICA  ELISA Kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H581人組織相容性復合體Ⅰ類相關基因B（MICB）ELISA檢測試劑盒Human MICB  ELISA Kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H582人組織相容性復合體Ⅰ類相關基因D（MICD）ELISA檢測試劑盒Human MICD  ELISA Kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H583人脂多糖（LPS）ELISA檢測試劑盒Human Lipopolysaccharides,LPS ELISA kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H584人糖連抗原199（CA199）ELISA檢測試劑盒Human CA199   ELISA Kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H585人糖連抗原153（CA153）ELISA檢測試劑盒Human CA153   ELISA Kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H586人組織因子途徑抑制物（TFPI）ELISA檢測試劑盒Human Tissue factor pathway inhibitor,TFPI ELISA Kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H587人組織多肽抗原（TPA）ELISA檢測試劑盒Human Tissue Polypeptide Antigen,TPA ELISA Kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H588人組織因子（TF）ELISA檢測試劑盒Human Tissue factor,IF ELISA Kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H589人組織相容性2-K1-K區(qū)（H2-K1）ELISA檢測試劑盒human Histocompatibility 2-K1-K region,H2-K1 ELISA Kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H590人類似cDNA順序BC027382ELISA檢測試劑盒human similar to cDNA sequence BC027382 ELISA Kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H591人類似RIKENcDNA4931408D14基因ELISA檢測試劑盒human similar to RIKEN cDNA 4931408D14 gene ELISA kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物