鴨半胱氨酸蛋白酶3(Casp-3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被人白介素10(IL-10)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人白介素10(IL-10)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

鴨半胱氨酸蛋白酶3(Casp-3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標(biāo)準品孔、樣本孔和空白孔，空白孔什么都不加；標(biāo)準品孔各加不同濃度的標(biāo)準品50μL；

3.  待測樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；

4.  隨后標(biāo)準品孔和樣本孔中（空白孔不加）加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體50μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.  所有孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  所有孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

鴨半胱氨酸蛋白酶3(Casp-3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

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