凝血酶和肝素輔因子Ⅱ是人體凝血及抗凝血系統(tǒng)中的重要組成部分。肝素輔因子Ⅱ在有肝素或硫酸皮膚素催化時(shí),可迅速抑制凝血酶活性。研究肝素輔因子Ⅱ與凝血酶相互作用的分子機(jī)制有助于發(fā)現(xiàn)或設(shè)計(jì)出對(duì)血栓性疾病治療有效的凝血酶拮抗劑,對(duì)血栓性疾病的預(yù)防和治療提供新手段和帶來(lái)新希望。

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中犬肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ)水平。用純化的犬肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ))抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ),再與HRP標(biāo)記的肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色.顏色的深淺和樣品中的肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中犬肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ)濃度。

研究人黃素化顆粒細(xì)胞中肝素結(jié)合表皮生長(zhǎng)因子(HB-EGF)的表達(dá)特點(diǎn).方法:收集體外受精-胚胎移植過(guò)程中的人黃素化顆粒細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng);應(yīng)用RT-PCR法和免疫細(xì)胞化學(xué)法分別檢測(cè)HB-EGF的mRNA和蛋白表達(dá);應(yīng)用實(shí)時(shí)RT-PCR法檢測(cè)HB-EGFmRNA量的變化。結(jié)果:人黃素化顆粒細(xì)胞中存在HB-EGF的mRNA和蛋白表達(dá)。培養(yǎng)基中加入重組HB-EGF后,HB-EGF mRNA的表達(dá)量迅速上升,2 h內(nèi)達(dá)高峰,然后回落,于12 h內(nèi)降至處理前水平.結(jié)論:人黃素化顆粒細(xì)胞中存在HB-EGF的表達(dá);人黃素化顆粒細(xì)胞中的HB-EGF可能是瞬時(shí)早期反應(yīng)基因。