建立一種定量測(cè)定人血清中總25-羥基維生素D(25-OH VD)含量的磁微?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析法.方法使用競(jìng)爭(zhēng)法,樣本中的25-OH VD與生物素化25-OH VD衍生物共同競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合堿性磷酸酶標(biāo)記的25-OH VD單克隆抗體,生物素化25-OH VD衍生物再結(jié)合鏈霉親和素磁珠,形成抗體-抗原衍生物-磁珠的復(fù)合物,通過(guò)檢測(cè)復(fù)合物的光信號(hào)來(lái)測(cè)定樣本中25-OH VD的濃度.并對(duì)建立的方法進(jìn)行準(zhǔn)確度,精密度,線(xiàn)性,干擾,穩(wěn)定性以及方法比對(duì)等性能評(píng)價(jià).結(jié)果建立的方法準(zhǔn)確度偏差小于10%;批內(nèi)和批間精密度均小于10%;在3.17~98.75 ng/m L之間測(cè)量值與靶值線(xiàn)性良好;生物素濃度不大于250 nmol/L,三酰甘油濃度不大于1 500 mg/d L,血紅蛋白濃度不大于1 500 mg/d L,膽紅素濃度不大于200 mg/d L時(shí),對(duì)樣本檢測(cè)不產(chǎn)生明顯干擾作用; 25-OH VD磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫分析法試劑在4℃條件下21 d內(nèi)具有較好的穩(wěn)定性.與Immunodiagnostic Systems公司25-OH VD檢測(cè)試劑盒(ELISA法)同時(shí)測(cè)定200例樣本,回歸方程為Y=1.006 2 X-0.166 3,r~2=0.979 2.結(jié)論建立的方法可定量測(cè)定25-OH VD,具有良好的性能,可以滿(mǎn)足需求.

建立一種新型易于各級(jí)醫(yī)院普及的25-羥基維生素D(25-OHVD)全自動(dòng)檢測(cè)方法,并對(duì)其檢測(cè)性能進(jìn)行驗(yàn)證及評(píng)估以確定其是否滿(mǎn)足需求。方法在全自動(dòng)生化分析儀上用商品化試劑盒測(cè)定血清中的25-OHVD,并依照美國(guó)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)的推薦方法(EP)對(duì)該方法進(jìn)行系統(tǒng)的方法學(xué)評(píng)估,包含準(zhǔn)確度、靈敏度、精密度、線(xiàn)性、抗干擾性能及相關(guān)性評(píng)價(jià)。

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4(TRAIL-R4)水平.用純化的壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4(TRAIL-R4)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4(TRAIL-R4),再與HRP標(biāo)記的TRAIL-R4抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色.TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色.顏色的深淺和樣品中的壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4(TRAIL-R4)呈正相關(guān).用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中大鼠壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4(TRAIL-R4)濃度.