建立一種定量測定人血清中總25-羥基維生素D(25-OH VD)含量的磁微?；瘜W發(fā)光免疫分析法.方法使用競爭法,樣本中的25-OH VD與生物素化25-OH VD衍生物共同競爭結合堿性磷酸酶標記的25-OH VD單克隆抗體,生物素化25-OH VD衍生物再結合鏈霉親和素磁珠,形成抗體-抗原衍生物-磁珠的復合物,通過檢測復合物的光信號來測定樣本中25-OH VD的濃度.并對建立的方法進行準確度,精密度,線性,干擾,穩(wěn)定性以及方法比對等性能評價.結果建立的方法準確度偏差小于10%;批內和批間精密度均小于10%;在3.17~98.75 ng/m L之間測量值與靶值線性良好;生物素濃度不大于250 nmol/L,三酰甘油濃度不大于1 500 mg/d L,血紅蛋白濃度不大于1 500 mg/d L,膽紅素濃度不大于200 mg/d L時,對樣本檢測不產生明顯干擾作用; 25-OH VD磁微粒化學發(fā)光免疫分析法試劑在4℃條件下21 d內具有較好的穩(wěn)定性.與Immunodiagnostic Systems公司25-OH VD檢測試劑盒(ELISA法)同時測定200例樣本,回歸方程為Y=1.006 2 X-0.166 3,r~2=0.979 2.結論建立的方法可定量測定25-OH VD,具有良好的性能,可以滿足需求.

建立一種新型易于各級醫(yī)院普及的25-羥基維生素D(25-OHVD)全自動檢測方法,并對其檢測性能進行驗證及評估以確定其是否滿足需求。方法在全自動生化分析儀上用商品化試劑盒測定血清中的25-OHVD,并依照美國實驗室標準化協(xié)會(CLSI)的推薦方法(EP)對該方法進行系統(tǒng)的方法學評估,包含準確度、靈敏度、精密度、線性、抗干擾性能及相關性評價。

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人壞死因子相關凋亡誘導配體4(TRAIL-R4)水平.用純化的壞死因子相關凋亡誘導配體4(TRAIL-R4)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入壞死因子相關凋亡誘導配體4(TRAIL-R4),再與HRP標記的TRAIL-R4抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色.TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色.顏色的深淺和樣品中的壞死因子相關凋亡誘導配體4(TRAIL-R4)呈正相關.用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠壞死因子相關凋亡誘導配體4(TRAIL-R4)濃度.