牛片形吸蟲(chóng)(fasciola)ELISA試劑盒

南京博研生物科技有限公司  ELISA試劑盒在國(guó)內(nèi)有許多種叫法，例如：ELISA檢測(cè)試劑盒、ELISA Kit、酶聯(lián)免疫試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等，比較常見(jiàn)的叫法是ELISA檢測(cè)試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒等。ELISA試劑盒自從60-70年代問(wèn)世以來(lái)，得到全世界科研工作者的認(rèn)可及推崇，在歐美及中國(guó)獲得很大的推廣，尤其是國(guó)內(nèi)生化領(lǐng)域的長(zhǎng)足發(fā)展。Elisa生物試驗(yàn)是一種敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。ELISA檢測(cè)試劑盒適用于體外定性檢測(cè)人血清或血漿中的抗人類(lèi)戊型肝炎（HEV） IgM 抗體ELISA檢測(cè)。

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    O157(E.Coli O157)大腸桿菌是腸出血性大腸桿菌中最多見(jiàn)的1個(gè)血清型,人食入被大腸桿菌污染的食物會(huì)引發(fā)食物中毒.1996年,日本暴發(fā)了O157導(dǎo)致的人群感染,近期在韓國(guó),中國(guó)臺(tái)灣等國(guó)家和地區(qū)均有O157感染的報(bào)道,1998年中華人民共和園皇崗出入境檢驗(yàn)檢疫局(深圳)從香港進(jìn)口的冰鮮魚(yú)中檢出了O157大腸桿菌.為保護(hù)我國(guó)畜牧業(yè)生產(chǎn)和人民健康,防止O157大腸桿菌在我國(guó)蔓延,建立快速技術(shù)是十分必要的.

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為了建立一種有效的牛結(jié)核病間接ELISA方法,本研究設(shè)計(jì)了3對(duì)引物,從牛分枝桿菌ValleeⅢ菌株的基因組中PCR擴(kuò)增出三個(gè)目的基因mpb70、mpb83和esat-6,采用重疊延伸剪接技術(shù)(splice by overlapping extension,SOE)獲得融合基因mpb70-mpb83。經(jīng)過(guò)多次亞克隆步驟后,將DNA片段mpb70-mpb83和esat-6串連于同一表達(dá)載體pET32a(+)中,獲得了重組質(zhì)粒pET70-83-E6。將該重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化BL21(DE3)大腸桿菌感受態(tài)后,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)帶有兩個(gè)六組氨酸標(biāo)簽的融合蛋白rM70-83-E6。以Ni~(2+)鰲合層析的方法純化該融合蛋白。Western blot分析表明該蛋白具有良好的免疫反應(yīng)活性。 以融合蛋白rM70-83-E6作為包被抗原,在確定了封閉液和包被條件后,采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)的方法摸索了抗原、一抗和二抗稀釋度,以及一抗、二抗作用時(shí)間和顯色時(shí)間,建立了檢測(cè)牛結(jié)核病抗體的間接ELISA方法。用150份健康牛血清的檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析后確定方法的判定標(biāo)準(zhǔn),即樣本S/P大于0.5為陽(yáng)性,小于0.4為陰性,兩者之間為可疑。 通過(guò)對(duì)85份牛結(jié)核病血清和100份無(wú)結(jié)核病牛血清的檢測(cè)結(jié)果表明,ELISA方法的敏感性為69.41%(59/85),特異性為96%(96/100)。對(duì)50份PPD陰性血清和67份PPD陽(yáng)性血清(117份)進(jìn)行檢測(cè),并與PPD皮試進(jìn)行比較,本方法與PPD皮試的符合