基本信息：
產(chǎn)品名稱：6磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）/葡萄糖6磷酸脫氫酶微量法檢測試劑盒
測試方法: 微量法
規(guī)格 : 100管/96樣
貨號：GOY-01S6353
分類：輔酶Ⅱ系列
測定意義：
G6PDH（EC 1.1.1.49）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是磷酸戊糖途徑的關(guān)鍵酶，催化 6-磷酸葡萄糖氧化為 6 -磷酸葡萄糖酸內(nèi)酯，同時將NADP+還原為NADPH，供生物合成及維持細(xì)胞內(nèi)的還原狀態(tài)用。因此6-磷酸葡萄糖脫氫酶活性的高低可以從一定程度上反映出生物體的生物合成和抗氧化能力。

測定原理：

G6PDH催化NADP+還原生成NADPH，在340 nm下測定NADPH增加速率。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑四：液體×1瓶，4℃避光保存，未變成藍(lán)綠色之前均可使用。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1支（EP管中），2 μmol/mL酚標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。
測定步驟：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到510 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三置于37℃水浴中預(yù)熱30 min。
3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸餾水，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A空白管。
4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管，加入4μL標(biāo)準(zhǔn)品，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
5. 對照管：取EP管，加入4μL上清液，40μL蒸餾水，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。
6. 測定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。
其中標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需做一管，測定管和對照管每個樣均需做。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。產(chǎn)品僅用于科研
小鼠β-防御素(β-DF)ELISA試劑盒 ，英文名： β-DF ELISA Kit

大鼠巨噬細(xì)胞炎癥蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA檢測試劑盒Ratmacrophageinflammatoryprotein1α,MIP-1αELISAKit 96T/48T

人N鈣黏蛋白/神經(jīng)鈣黏蛋白(N-Cad)免疫試劑盒 Human N-Cad ELISA kit

英文名稱MouseANCAELISAKit小鼠抗嗜中性粒細(xì)胞胞漿抗體(ANCA)規(guī)格：96T/48T

苯甲酰酰膽堿酯酶活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒20次

rabbitTissuePolypeptideAigen,TPAELISA試劑盒兔子組織多肽抗原(TPA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
植物維生素E(VE)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human liver specific lipoprotein aibody (LSP) ELISA Kit 人抗肝特異性脂蛋白抗體(LSP)ELISA試劑盒

PorcineCoicosterone,COELISAKit 豬皮質(zhì)酮/腎上腺酮(CO)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAFP-L1(Humanalpha-fetoproteinLensculinarisaggliin1)ELISAKit人小扁結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體1規(guī)格：48T/96T

血液維生素D比色法定量檢測試劑盒20次

MouseThromboxaneB2,TXB2ELISAKit小鼠血栓素B2(TXB2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
ANA(Human anti-nucleolus antibody) ELISA Kit 人抗核仁抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-IL-12 (human) 白介素12抗體(人)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh MAD2 有絲分裂阻滯缺陷蛋白2抗體 規(guī)格 0.2ml

15-LO/LOX(Human 15-lipoxygenase) ELISA Kit 人15脂加氧酶 96T

RTF1 英文名稱： 組織相容性復(fù)合物RTF1抗體 0.2ml

CCR10 英文名稱： 細(xì)胞表面趨化因子受體10抗體 0.1ml

Anti-IL-12 (human) 白介素12抗體(人)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
6磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）/葡萄糖6磷酸脫氫酶微量法檢測試劑盒Anti-CD67/CEAcam8/FITC 熒光素標(biāo)記整合素樣癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞粘附分子8抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-IFNGR2/FITC 熒光素標(biāo)記干擾素-gamma受體2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh CD5 CD5抗體 規(guī)格 0.1ml

OCLN(Occluding) 咬合蛋白抗原 0.5mg

AIF1 英文名稱： 離子鈣接頭蛋白抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh SYTL5/slp5 突觸樣蛋白5亞型2抗體 規(guī)格 0.1ml

Anti-IFNGR2/FITC 熒光素標(biāo)記干擾素-gamma受體2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
操作步驟：
1. 樣品的準(zhǔn)備：
a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測定。
2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進(jìn)行稀釋，即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進(jìn)行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
3. 樣品測定：
a. 參考下表使用96孔板加入各個組分，注意設(shè)置樣品孔和各種空白對照孔。
注意：加入反應(yīng)啟動工作液后反應(yīng)即會開始，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應(yīng)啟動工作液的時間先后差異而導(dǎo)致的誤差。
b. 37℃孵育30分鐘。
說明：孵育25至35分鐘檢測出來的SOD活力無顯著差異，但為保證檢測結(jié)果的一致性，推薦孵育30分鐘。
c. 450nm 測定吸光度。如無450nm 濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長作為參考波長進(jìn)行雙波長測定。
4. 樣品中總SOD活力的計(jì)算：
a. 抑制百分率的計(jì)算：
參考如下計(jì)算公式計(jì)算抑制百分率：
抑制百分率＝[(A空白對照1－A空白對照2)－(A樣品－A空白對照3)] / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%
如果沒有設(shè)置空白對照3，則可以把計(jì)算公式簡化為：
抑制百分率＝(A空白對照1－A樣品) / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%
如果計(jì)算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ，則通常需要把該樣品重新測定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測定出來的抑制百分率偏高，則需適當(dāng)稀釋樣品；如果測定出來的抑制百分率偏低，則需重新準(zhǔn)備濃度較高的待測樣品。
b. SOD酶活力單位的定義：在上述化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50% 時，反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個酶活力單位 (unit)。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種，不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進(jìn)行適當(dāng)換算。