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類黃酮糖基轉移酶-UFGT-微量法檢測試劑盒
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測定意義:
花色苷是一類易溶于極性溶劑的天然色素,屬黃酮類化合物?;ㄉ諒V泛存在于植物的根、莖、葉、花和果實中,使其呈現(xiàn)由紅到紫等不同顏色,是植物主要的呈色物質(zhì)。
類黃酮糖基轉移酶(UDP-glycose flavonoid glycosyltransferase, UFGT)是花色苷合成過程的最后一個酶,可以把不穩(wěn)定的花色素催化成花色苷,在一定范圍內(nèi),UFGT活性與花色素苷的合成呈現(xiàn)正相關。
測定原理:
UFGT催化UDPG與槲皮素生成UDP;UDP在丙酮酸激酶與乳酸脫氫酶作用下,氧化NADH為NAD+,NAD+生成速度與UDP含量成正比,通過340nm吸光度下降速度反映UFGT活性。
需自備的儀器和用品:
酶標儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96孔酶標板、研缽、冰和蒸餾水。
基本信息:
產(chǎn)品名稱:類黃酮糖基轉移酶(UFGT)微量法檢測試劑盒
測試方法: 微量法
規(guī)格 : 100管/96樣
貨號:GOY-01S6470
分類:氧化與抗氧化系列
試劑組成和配制:
試劑一:液體×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體×1瓶,4℃避光保存。
試劑三:液體×1瓶,4℃避光保存。
試劑四:液體×1瓶,4℃避光保存,未變成藍綠色之前均可使用。
標準品:液體×1支(EP管中),2 μmol/mL酚標準液,4℃保存。
測定步驟:
1. 分光光度計/酶標儀預熱30min,調(diào)節(jié)波長到510 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三置于37℃水浴中預熱30 min。
3. 空白管:取EP管,加入4μL蒸餾水,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A空白管。
4. 標準管:取EP管,加入4μL標準品,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A標準管。
5. 對照管:取EP管,加入4μL上清液,40μL蒸餾水,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A測定管。
6. 測定管:取EP管,加入4μL上清液,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A測定管。
其中標準管和空白管只需做一管,測定管和對照管每個樣均需做。
注意:空白管和標準管只需測定一次。
操作步驟:
1. 樣品的準備:產(chǎn)品僅用于科研
a. 細胞樣品的準備:收集細胞,用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定,可以冰浴保存;如果當天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當天完成測定。
2. 試劑盒的準備工作:
a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當混勻后再使用。
b. 反應啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標準品準備:需自備SOD標準品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品,但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
3. 樣品測定:
a. 參考下表使用96孔板加入各個組分,注意設置樣品孔和各種空白對照孔。
注意:加入反應啟動工作液后反應即會開始,可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應啟動工作液的時間先后差異而導致的誤差。
b. 37℃孵育30分鐘。
說明:孵育25至35分鐘檢測出來的SOD活力無顯著差異,但為保證檢測結果的一致性,推薦孵育30分鐘。
c. 450nm 測定吸光度。如無450nm 濾光片,可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長作為參考波長進行雙波長測定。
4. 樣品中總SOD活力的計算:
a. 抑制百分率的計算:
參考如下計算公式計算抑制百分率:
抑制百分率=[(A空白對照1-A空白對照2)-(A樣品-A空白對照3)] / (A空白對照1-A空白對照2) × 100%
如果沒有設置空白對照3,則可以把計算公式簡化為:
抑制百分率=(A空白對照1-A樣品) / (A空白對照1-A空白對照2) × 100%
如果計算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ,則通常需要把該樣品重新測定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測定出來的抑制百分率偏高,則需適當稀釋樣品;如果測定出來的抑制百分率偏低,則需重新準備濃度較高的待測樣品。
b. SOD酶活力單位的定義:在上述化酶藕聯(lián)反應體系中抑制百分率為50% 時,反應體系中的SOD酶活力定義為一個酶活力單位 (unit)。注意:SOD的活力單位的定義方式有很多種,不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進行適當換算。
小鼠白介素1可溶性受體Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA試劑盒 ,英文名: IL-1sRⅠ ELISA Kit
大鼠轉化生長因子β1(TGF-β1)ELISA檢測試劑盒RatansformingGrowthfactorβ1,TGF-β1ELISAkit 96T/48T
人Syndecan-1/CD138(SDC1)免疫試劑盒 Human SDC1 ELISA Kit
英文名稱MouseDHEA-SELISAKit小鼠去氫表雄同(DHEA-S)規(guī)格:96T/48T
TSH-BETA蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒25次
rabbitN-terminalprocollagenⅢpropeptide,PⅢNPELISA試劑盒兔子Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
豬水通道蛋白4(AQP4)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human tissue inhibitors of maix metalloproteinases 1 (TIMP-1) ELISA Kit 人基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒
GuineaPigEndothelialniicoxidesyhase,eNOSELISAKit 內(nèi)皮型合成酶(eNOS)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforANG-4(MouseAngiopoietin4)ELISAKit小鼠血管生成素4規(guī)格:48T/96T
血液丁酰膽堿酯酶活性比色法定量檢測試劑盒20次
PorcineFactor-relatedApoptosis,FASELISAKit豬凋亡相關因子(FAS/CD95)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
BrdU(Mouse Bromodeoxyuridine) ELISA Kit 小鼠溴脫氧核苷尿嘧啶Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-cath-H/CH /FITC 熒光素標記組織蛋白酶H抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh EIF2C1/Ago1 真核翻譯起始因子2C1抗體 規(guī)格 0.2ml
ABAb (Rabbit anti-brain tissue antibody) ELISA Kit 兔抗腦組織抗體 96T
MAP-9 英文名稱: 微管相關蛋白9抗體 0.2ml
Aurora C 英文名稱: 有絲分裂激酶B抗體 0.2ml
Anti-cath-H/CH /FITC 熒光素標記組織蛋白酶H抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
類黃酮糖基轉移酶(UFGT)微量法檢測試劑盒Anti-AT1R/RBITC 紅色羅丹明標記血管緊張素Ⅱ-1型受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2mg
CSIG(cellular senescence inhibited gene) 細胞衰老抑制基因抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型-12抗體 Anti-ADAM-TS12 0.1ml
ZAR1L 英文名稱: 受精卵抑制蛋白1樣蛋白抗體 0.2ml
Dishevelled 2 英文名稱: 蓬亂蛋白2抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-FAS (Tyr232) 0酸化載脂蛋白A1抗體 規(guī)格 0.1ml
CSIG(cellular senescence inhibited gene) 細胞衰老抑制基因抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml