谷氨酸脫氫酶(GDH)微量法檢測(cè)試劑盒
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品牌 谷研
保質(zhì)期 詳見說明書
含量 詳見說明書
是否危險(xiǎn)化學(xué)品
規(guī)格 100管/96樣
貨號(hào) GOY-01S6486
檢測(cè)方法 微量法
分類 氮代謝系列
用途 僅供科研使用
包裝
商品介紹

測(cè)定步驟:
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長到510 nm,蒸餾水調(diào)零。
2.
試劑三置于37℃水浴中預(yù)熱30 min
3.
空白管:取EP管,加入4μL蒸餾水,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測(cè)定吸光度,記為A空白管。
4.
標(biāo)準(zhǔn)管:取EP管,加入4μL標(biāo)準(zhǔn)品,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測(cè)定吸光度,記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
5.
對(duì)照管:取EP管,加入4μL上清液,40μL蒸餾水,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測(cè)定吸光度,記為A測(cè)定管。
6.
測(cè)定管:取EP管,加入4μL上清液,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測(cè)定吸光度,記為A測(cè)定管。
其中標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需做一管,測(cè)定管和對(duì)照管每個(gè)樣均需做。
注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

基本信息:
產(chǎn)品名稱:谷氨酸脫氫酶(GDH)微量法檢測(cè)試劑盒
測(cè)試方法: 微量法
規(guī)格 : 100/96
貨號(hào):GOY-01S6486
分類:氮代謝系列
測(cè)定意義:
GDHEC 1.4.1.2)廣泛分布于植物中,和谷氨酸合成酶(GOGAT)共同參與谷氨酸的合成,在氨同化和轉(zhuǎn)化成有機(jī)氮化合物的代謝中起重要作用。

測(cè)定原理:

GDH催化NH4+、α-酮戊二酸和NADH,生成谷氨酸和NAD+,引起340nm吸光度下降。通過測(cè)定340nm吸光度的下降速率,計(jì)算GDH活性。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

操作步驟:
1. 樣品的準(zhǔn)備:產(chǎn)品僅用于科研
a.
細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備:收集細(xì)胞,用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測(cè)樣品。
b.
組織樣品的準(zhǔn)備:動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測(cè)樣品。
d.
使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(P1511)測(cè)定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測(cè)。
e.
根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測(cè)定,可以冰浴保存;如果當(dāng)天不能完成測(cè)定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當(dāng)天完成測(cè)定。
2.
試劑盒的準(zhǔn)備工作:
a. WST-8
酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測(cè)樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當(dāng)混勻后再使用。
b.
反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制:將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測(cè)緩沖液的比例進(jìn)行稀釋,即為反應(yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (
可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備:需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度:20U/ml10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測(cè)中可以各取20微升,參考樣品進(jìn)行檢測(cè)。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對(duì)于SOD的檢測(cè)并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品,但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對(duì)照或作為對(duì)SOD活性定量的參考。
3.
樣品測(cè)定:
a.
參考下表使用96孔板加入各個(gè)組分,注意設(shè)置樣品孔和各種空白對(duì)照孔。
注意:加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液后反應(yīng)即會(huì)開始,可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液的時(shí)間先后差異而導(dǎo)致的誤差。
b. 37
℃孵育30分鐘。
說明:孵育2535分鐘檢測(cè)出來的SOD活力無顯著差異,但為保證檢測(cè)結(jié)果的一致性,推薦孵育30分鐘。
c. 450nm
測(cè)定吸光度。如無450nm 濾光片,可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長作為參考波長進(jìn)行雙波長測(cè)定。
4.
樣品中總SOD活力的計(jì)算:
a.
抑制百分率的計(jì)算:
參考如下計(jì)算公式計(jì)算抑制百分率:
抑制百分率=[(A空白對(duì)照1A空白對(duì)照2)(A樣品-A空白對(duì)照3)] / (A空白對(duì)照1A空白對(duì)照2) × 100%
如果沒有設(shè)置空白對(duì)照3,則可以把計(jì)算公式簡化為:
抑制百分率=(A空白對(duì)照1A樣品) / (A空白對(duì)照1A空白對(duì)照2) × 100%
如果計(jì)算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ,則通常需要把該樣品重新測(cè)定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測(cè)定出來的抑制百分率偏高,則需適當(dāng)稀釋樣品;如果測(cè)定出來的抑制百分率偏低,則需重新準(zhǔn)備濃度較高的待測(cè)樣品。
b. SOD
酶活力單位的定義:在上述化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50% 時(shí),反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個(gè)酶活力單位 (unit)。注意:SOD的活力單位的定義方式有很多種,不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進(jìn)行適當(dāng)換算。

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大鼠血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶Multi-class antibodies規(guī)格: 48T

Anti-Tat 細(xì)胞酪氨酸轉(zhuǎn)氨酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh Goat Anti-Chicken IgG/Cy7 Cy7標(biāo)記的羊抗雞IgG 規(guī)格 0.1ml

ACA-IgA ELISA Kit 大鼠抗心0脂抗體IgA 96T

NXPH2 英文名稱: 神經(jīng)外營養(yǎng)蛋白2抗體 0.2ml

CD238 英文名稱: 凱爾血型糖蛋白CD238抗體 0.2ml

Anti-Tat 細(xì)胞酪氨酸轉(zhuǎn)氨酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
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HCMV UL23/HHV5 UL23(Human Cytomegalovirus UL23 Gene) 人巨細(xì)胞病毒UL23抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg

心肽(心素)抗體 Anti-ANP 0.1ml

ZBTB40 英文名稱: 鋅指蛋白923抗體 0.2ml

DPPL1 英文名稱: 0脂酸0酸酶HTPAP抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Estrogen Receptor alpha (Ser167) 0酸化雌激素受體ER alpha 抗體 規(guī)格 0.1ml

HCMV UL23/HHV5 UL23(Human Cytomegalovirus UL23 Gene) 人巨細(xì)胞病毒UL23抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
試劑組成和配制:
試劑一:液體×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體×1瓶,4℃避光保存。
試劑三:液體×1瓶,4℃避光保存。
試劑四:液體×1瓶,4℃避光保存,未變成藍(lán)綠色之前均可使用。
標(biāo)準(zhǔn)品:液體×1支(EP管中),2 μmol/mL酚標(biāo)準(zhǔn)液,4℃保存。


聯(lián)系方式
公司名稱 上海谷研實(shí)業(yè)有限公司
聯(lián)系賣家 郭小姐 (QQ:3004905818)
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