基本信息：
產(chǎn)品名稱：賴氨酸（LYS）可見分光光度法檢測試劑盒
測試方法: 可見分光光度法
規(guī)格 : 50管/48樣
貨號：GOY-01S6539
分類：氨基酸代謝系列
測定意義：
賴氨酸是人體必需氨基酸之一，能促進人體發(fā)育、增強免疫功能，并有提高中樞神經(jīng)組織功能的作用。賴氨酸為堿性必需氨基酸。由于谷物食品中的賴氨酸含量甚低，且在加工過程中易被破壞而缺乏，故稱為第一限制性氨基酸。

測定原理：

蛋白質(zhì)中的賴氨酸具有一個游離的ε-NH2，它與茚三酮試劑反應(yīng)生成藍紫色物質(zhì)，其顏色的深淺在一定范圍內(nèi)與賴氨酸的含量成線性關(guān)系。亮氨酸與賴氨酸的碳原子數(shù)目相同，而且僅有—個游離氨基(ε-NH2)，所以通常用亮氨酸配制標(biāo)準(zhǔn)液。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水、水浴鍋。
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑四：液體×1瓶，4℃避光保存，未變成藍綠色之前均可使用。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1支（EP管中），2 μmol/mL酚標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。
測定步驟：
1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到510 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三置于37℃水浴中預(yù)熱30 min。
3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸餾水，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A空白管。
4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管，加入4μL標(biāo)準(zhǔn)品，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
5. 對照管：取EP管，加入4μL上清液，40μL蒸餾水，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。
6. 測定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。
其中標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需做一管，測定管和對照管每個樣均需做。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。產(chǎn)品僅用于科研
小鼠α1微球蛋白(α1-MG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Rat myeloperoxidase specificity of ai neuophil cytoplasmic aibody IgG (MPO-ANCA IgG)ELISA Kit 大鼠髓過氧化物酶特異性抗中性粒細胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCA IgG)ELISA試劑盒

Humanleoopichormone,LHELISAKit 人促黃體激素(LH)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanClaracellprotein,CC16ELISA試劑盒人克拉拉細胞蛋白(CC16)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

組蛋白脫乙?；?/span>(HDAC)總活性比色法定量檢測試劑盒20次

Humaotavirusaigen，RVAgELISAKit人輪狀病毒抗原(RVAg)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
羊雌激素(E)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human ai epidemic hemorrhagic fever virus IgG aibody (EHF) ELISA Kit 人抗流行性出血熱病毒抗體IgG (EHF)ELISA試劑盒

Humanniicoxidesyhase,NOSELISAKit 人合成酶(NOS)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforADAM9ELISAKit小鼠解整合素樣金屬蛋白酶9規(guī)格：48T/96T

血液誘導(dǎo)型巨噬細胞合成酶(iNOS/NOS2/mNOS)活性熒光定量檢測試劑盒20次

MousePulmonarysurfatca-associatedproteinA,SP-AELISAKit小鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
PTHrP ELISA Kit 大鼠甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-VPS18 空泡分選蛋白18抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh GCDFP15 特異性囊腫病液體蛋白15抗體 規(guī)格 0.2ml

ACV-A(Human Activin A) ELISA Kit 人活化素A 96T

Phospho-NFKBIA (Tyr42) 英文名稱： 0酸化IKB α抗體 0.1ml

AANAT 英文名稱： 芳香胺N-乙?；D(zhuǎn)移酶抗體 0.2ml

Anti-VPS18 空泡分選蛋白18抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
賴氨酸（LYS）可見分光光度法檢測試劑盒Anti-TBX2/T-box2/FITC 熒光素標(biāo)記新型抑癌基因抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Integrin Beta chain (ITG- Beta3/ITGB3) 整合素-β3(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

臂板蛋白3F抗體 Anti-Sema3F 0.2ml

SKP2 英文名稱： 細胞S期激酶相關(guān)蛋白2抗體 0.1ml

EBP1 英文名稱： erbB3結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-MEF2C(Ser387) 0酸化肌細胞增強因子2C抗體 規(guī)格 0.1ml

Integrin Beta chain (ITG- Beta3/ITGB3) 整合素-β3(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
操作步驟：
1. 樣品的準(zhǔn)備：
a. 細胞樣品的準(zhǔn)備：收集細胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測定。
2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋，即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
3. 樣品測定：
a. 參考下表使用96孔板加入各個組分，注意設(shè)置樣品孔和各種空白對照孔。
注意：加入反應(yīng)啟動工作液后反應(yīng)即會開始，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應(yīng)啟動工作液的時間先后差異而導(dǎo)致的誤差。
b. 37℃孵育30分鐘。
說明：孵育25至35分鐘檢測出來的SOD活力無顯著差異，但為保證檢測結(jié)果的一致性，推薦孵育30分鐘。
c. 450nm 測定吸光度。如無450nm 濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長作為參考波長進行雙波長測定。
4. 樣品中總SOD活力的計算：
a. 抑制百分率的計算：
參考如下計算公式計算抑制百分率：
抑制百分率＝[(A空白對照1－A空白對照2)－(A樣品－A空白對照3)] / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%
如果沒有設(shè)置空白對照3，則可以把計算公式簡化為：
抑制百分率＝(A空白對照1－A樣品) / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%
如果計算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ，則通常需要把該樣品重新測定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測定出來的抑制百分率偏高，則需適當(dāng)稀釋樣品；如果測定出來的抑制百分率偏低，則需重新準(zhǔn)備濃度較高的待測樣品。
b. SOD酶活力單位的定義：在上述化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50% 時，反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個酶活力單位 (unit)。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種，不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進行適當(dāng)換算。