基本信息：
產(chǎn)品名稱：檸檬酸（CA）含量微量法檢測(cè)試劑盒
測(cè)試方法: 微量法
規(guī)格 : 100管/96樣
貨號(hào)：GOY-01S6573
分類：三羧酸循環(huán)系列
測(cè)定意義：
CA又稱枸櫞酸，廣泛存在于各種生物胞質(zhì)中，是生物體內(nèi)重要的有機(jī)酸。CA也存在于線粒體基質(zhì)中，是三羧酸循環(huán)第一步反應(yīng)的產(chǎn)物，與脂肪、蛋白質(zhì)和糖最終轉(zhuǎn)化為二氧化碳密切相關(guān)。

測(cè)定原理

酸性條件下，檸檬酸可將Cr6+還原成Cr3+，在545nm處有特征吸收峰；通過測(cè)定545nm吸光值的增加，即可計(jì)算出樣品中檸檬酸含量。

實(shí)驗(yàn)中所需儀器及設(shè)備

可見分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、掌上離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、1ml玻璃比色皿、雙蒸水
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑四：液體×1瓶，4℃避光保存，未變成藍(lán)綠色之前均可使用。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1支（EP管中），2 μmol/mL酚標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。
測(cè)定步驟：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到510 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三置于37℃水浴中預(yù)熱30 min。
3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸餾水，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A空白管。
4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管，加入4μL標(biāo)準(zhǔn)品，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
5. 對(duì)照管：取EP管，加入4μL上清液，40μL蒸餾水，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A測(cè)定管。
6. 測(cè)定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A測(cè)定管。
其中標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需做一管，測(cè)定管和對(duì)照管每個(gè)樣均需做。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。產(chǎn)品僅用于科研
小鼠T細(xì)胞表面糖蛋白CD3 epsilon鏈(CD3E/T3E)ELISA試劑盒 ，英文名： CD3E/T3E ELISA Kit

大鼠血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA檢測(cè)試劑盒RatFibrinogenDegradationProduct,FDPELISAKit 96T/48T

人H-ras 免疫試劑盒 Human H-ras ELISA Kit

英文名稱MouseT4ELISAKit小鼠甲狀腺素(T4)規(guī)格：96T/48T

冰凍切片半胱氨酸蛋白酶-9(CASPASE-9)活性原位熒光染色檢測(cè)試劑盒50次

RatADisiegrinAndMetalloprotease9,ADAM9ELISA試劑盒大鼠解整合素樣金屬蛋白酶9(ADAM9)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
小鼠總膽固醇(TC)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human natural deoxyribonucleic acid aibody (n-DNA-Ab) ELISA Kit 人抗天然脫氧核糖核酸抗體(n-DNA-Ab)ELISA試劑盒

HumanPyridinoline,PYDELISAKit 人酚(PYD)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforACAST-DIV(HumanaoaibodiesagainsttheC-terminaldomainIV)ELISAKit人抗鈣蛋白酶抑素抗體規(guī)格：48T/96T

藥品糖精(saccharin)含量高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒20次

Mousep53/tumorprotein,p53/TP53ELISAKit小鼠p53(p53)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
PS-2(Human Presenilin 2) ELISA Kit 人早老素2Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Phospho-LATS1 (Ser909) 0酸化抑制基因LATS1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh KRIT1 腦海綿狀血管畸形蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml

ADM(Human adrenomedullin) ELISA Kit 人腎上腺髓質(zhì)素 96T

Phospho-Paxillin (Tyr118) 英文名稱： 0酸化樁蛋白Paxillin抗體 0.1ml

CALHM1 英文名稱： 鈣平衡調(diào)節(jié)蛋白1抗體 0.2ml

Anti-Phospho-LATS1 (Ser909) 0酸化抑制基因LATS1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
檸檬酸（CA）含量微量法檢測(cè)試劑盒Anti-HAS/RBITC 紅色羅丹明標(biāo)記人血清白蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

CRMP2/Dpysl2(collapsin response mediator protein-2) 二氫嘧啶酶樣2CRMP2抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

α-輔肌動(dòng)蛋白4抗體 Anti-α-ACTN4 0.1ml

Sin3b 英文名稱： 轉(zhuǎn)錄抑制蛋白Sin3b抗體 0.2ml

eEF1A2 英文名稱： 翻譯延伸因子EF-1 α2抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-FGFR1(Tyr653/654) 0酸化堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體1抗體 規(guī)格 0.1ml

CRMP2/Dpysl2(collapsin response mediator protein-2) 二氫嘧啶酶樣2CRMP2抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
操作步驟：
1. 樣品的準(zhǔn)備：
a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測(cè)樣品。
b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測(cè)樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（P1511）測(cè)定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測(cè)。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測(cè)定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測(cè)定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測(cè)定。
2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測(cè)樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測(cè)緩沖液的比例進(jìn)行稀釋，即為反應(yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測(cè)中可以各取20微升，參考樣品進(jìn)行檢測(cè)。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對(duì)于SOD的檢測(cè)并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對(duì)照或作為對(duì)SOD活性定量的參考。
3. 樣品測(cè)定：
a. 參考下表使用96孔板加入各個(gè)組分，注意設(shè)置樣品孔和各種空白對(duì)照孔。
注意：加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液后反應(yīng)即會(huì)開始，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液的時(shí)間先后差異而導(dǎo)致的誤差。
b. 37℃孵育30分鐘。
說明：孵育25至35分鐘檢測(cè)出來的SOD活力無顯著差異，但為保證檢測(cè)結(jié)果的一致性，推薦孵育30分鐘。
c. 450nm 測(cè)定吸光度。如無450nm 濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長(zhǎng)作為參考波長(zhǎng)進(jìn)行雙波長(zhǎng)測(cè)定。
4. 樣品中總SOD活力的計(jì)算：
a. 抑制百分率的計(jì)算：
參考如下計(jì)算公式計(jì)算抑制百分率：
抑制百分率＝[(A空白對(duì)照1－A空白對(duì)照2)－(A樣品－A空白對(duì)照3)] / (A空白對(duì)照1－A空白對(duì)照2) × 100%
如果沒有設(shè)置空白對(duì)照3，則可以把計(jì)算公式簡(jiǎn)化為：
抑制百分率＝(A空白對(duì)照1－A樣品) / (A空白對(duì)照1－A空白對(duì)照2) × 100%
如果計(jì)算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ，則通常需要把該樣品重新測(cè)定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測(cè)定出來的抑制百分率偏高，則需適當(dāng)稀釋樣品；如果測(cè)定出來的抑制百分率偏低，則需重新準(zhǔn)備濃度較高的待測(cè)樣品。
b. SOD酶活力單位的定義：在上述化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50% 時(shí)，反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個(gè)酶活力單位 (unit)。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種，不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進(jìn)行適當(dāng)換算。