測定意義：
蘋果酸合酶（MS，EC 4.1.3.2）是屬于轉(zhuǎn)移酶中酰基轉(zhuǎn)移酶的一類，主要存在于植物和微生物中。MS是乙醛酸循環(huán)的關(guān)鍵酶之一，在MS催化下乙醛酸與乙酰輔酶A反應(yīng)生成蘋果酸。

測定原理：

MS催化乙酰CoA和乙醛酸產(chǎn)生蘋果酸，同時生成輔酶A，輔酶A使無色的DTNB轉(zhuǎn)變成黃色的TNB，在 412nm處有特征吸光值。

需自備的儀器和用品：

酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96孔板、研缽、冰、和蒸餾水
基本信息：
產(chǎn)品名稱：蘋果酸合酶（MS）可見分光光度法檢測試劑盒
測試方法: 可見分光光度法
規(guī)格 : 50管/48樣
貨號：GOY-01S6600
分類：乙醛酸循環(huán)系列

試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑四：液體×1瓶，4℃避光保存，未變成藍(lán)綠色之前均可使用。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1支（EP管中），2 μmol/mL酚標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。
測定步驟：
1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到510 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三置于37℃水浴中預(yù)熱30 min。
3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸餾水，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A空白管。
4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管，加入4μL標(biāo)準(zhǔn)品，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
5. 對照管：取EP管，加入4μL上清液，40μL蒸餾水，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。
6. 測定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。
其中標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需做一管，測定管和對照管每個樣均需做。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。

操作步驟：
1. 樣品的準(zhǔn)備：產(chǎn)品僅用于科研
a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測定。
2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進(jìn)行稀釋，即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進(jìn)行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
3. 樣品測定：
a. 參考下表使用96孔板加入各個組分，注意設(shè)置樣品孔和各種空白對照孔。
注意：加入反應(yīng)啟動工作液后反應(yīng)即會開始，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應(yīng)啟動工作液的時間先后差異而導(dǎo)致的誤差。
b. 37℃孵育30分鐘。
說明：孵育25至35分鐘檢測出來的SOD活力無顯著差異，但為保證檢測結(jié)果的一致性，推薦孵育30分鐘。
c. 450nm 測定吸光度。如無450nm 濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長作為參考波長進(jìn)行雙波長測定。
4. 樣品中總SOD活力的計算：
a. 抑制百分率的計算：
參考如下計算公式計算抑制百分率：
抑制百分率＝[(A空白對照1－A空白對照2)－(A樣品－A空白對照3)] / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%
如果沒有設(shè)置空白對照3，則可以把計算公式簡化為：
抑制百分率＝(A空白對照1－A樣品) / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%
如果計算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ，則通常需要把該樣品重新測定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測定出來的抑制百分率偏高，則需適當(dāng)稀釋樣品；如果測定出來的抑制百分率偏低，則需重新準(zhǔn)備濃度較高的待測樣品。
b. SOD酶活力單位的定義：在上述化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50% 時，反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個酶活力單位 (unit)。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種，不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進(jìn)行適當(dāng)換算。

小鼠Sesin小鼠2蛋白(SESN2)ELISA試劑盒 ，英文名： SESN2 ELISA Kit

人抗凝血酶受體(A)ELISA檢測試劑盒Humanai-thrombieceptor,AELISAKit 96T/48T

大鼠紅細(xì)胞生成素受體(EPOR)免疫試劑盒 Rat  receptor,EPOR ELISA Kit

英文名稱RatSerotonin5-HydroxyyptamineELISAKit大鼠5-羥色氨(5-HT)規(guī)格：96T/48T

裂解液ⅩI非變性細(xì)胞蛋白制備

ELISAKitBDNF人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子規(guī)格：48T/96T
小鼠游離前列腺特異性抗原(fPSA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human ai histone aibody (AHA) ELISA Kit 人抗組蛋白抗體(AHA)ELISA試劑盒

HumanNeurotensin,ELISAKit 人神經(jīng)降壓素()ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitfor8-iso-PGELISAKit大鼠8異前列腺素規(guī)格：48T/96T

異硫酸胍1公斤

Mousemonocytechemotacticprotein4,MCP-4ELISAKit小鼠單核細(xì)胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
Anti-Annexin II/FITC 熒光素標(biāo)記膜粘連蛋白-2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-FBN1 /FITC 熒光素標(biāo)記原纖維蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Contactin 6/NB3/CNTN6 神經(jīng)細(xì)胞NB3特定蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml

AEBP1 (Adipocyte enhance binding protein 1) 脂肪細(xì)胞增強(qiáng)結(jié)合蛋白1 0.5mg

Kv4.3 英文名稱： 離子通道蛋白Kv4.3抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh TXNIP 硫氧還蛋白結(jié)合蛋白2抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-FBN1 /FITC 熒光素標(biāo)記原纖維蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
蘋果酸合酶（MS）可見分光光度法檢測試劑盒Anti-Smad 1/FITC 熒光素標(biāo)記Smad 1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

AD7C-NTP/NTP/AF peptide 神經(jīng)絲蛋白蛋白多肽抗原(人)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

神經(jīng)生長因子4/5抗體 Anti-NT-4/NT-5 0.2ml

SCNN1D 英文名稱： 上皮離子通道蛋白D/δENaC抗體 0.2ml

EGFR5 英文名稱： 表皮生長因子受體5抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-NUDC(Ser326) 0酸化細(xì)胞核分離基因C蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml

AD7C-NTP/NTP/AF peptide 神經(jīng)絲蛋白蛋白多肽抗原(人)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg