基本信息：
產(chǎn)品名稱：總膽固醇（TC）含量微量法檢測試劑盒
測試方法: 微量法
規(guī)格 : 100管/96樣
貨號：GOY-01S6649
分類：脂肪酸代謝系列
測定意義：
血清TC是指血液中所有脂蛋白所含膽固醇之總和?？偰懝檀及ㄓ坞x膽固醇和膽固醇酯。肝臟是TC合成和貯存的主要器官。膽固醇是合成腎上腺皮質(zhì)激素、性激素、膽汁酸及維生素D等生理活性物質(zhì)的重要原料，也是構(gòu)成的主要成分，其血清濃度可作為脂代謝的指標。臨床上將血總膽固醇增高稱為高膽固醇血癥。

測定原理

酯酶催化膽固醇酯作用下水解成游離膽固醇（FC）和游離脂肪酸（FFA），FC在膽固醇氧化酶作用下生成△4-膽甾烯酮和H2O2，H2O2在4-氨基安替比林和酚存在下，經(jīng)過氧化物酶作用下生成紅色醌類化合物，其顏色深淺與TC含量成正比

自備用品

可見分光光度計、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1ml玻璃比色皿、雙蒸水
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑四：液體×1瓶，4℃避光保存，未變成藍綠色之前均可使用。
標準品：液體×1支（EP管中），2 μmol/mL酚標準液，4℃保存。
測定步驟：
1. 分光光度計/酶標儀預熱30min，調(diào)節(jié)波長到510 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三置于37℃水浴中預熱30 min。
3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸餾水，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A空白管。
4. 標準管：取EP管，加入4μL標準品，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A標準管。
5. 對照管：取EP管，加入4μL上清液，40μL蒸餾水，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。
6. 測定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。
其中標準管和空白管只需做一管，測定管和對照管每個樣均需做。
注意：空白管和標準管只需測定一次。產(chǎn)品僅用于科研
小鼠N端前腦素(-proBNP)ELISA試劑盒 ，英文名： -proBNP ELISA Kit

大鼠表皮生長因子(EGF)ELISA檢測試劑盒RatEpidermalgrowthfactor,EGFELISAKit 96T/48T

人Ephrin-B2(EFNB2)免疫試劑盒 Human EFNB2 ELISA kit

英文名稱MouseTn-TELISAKit小鼠肌鈣蛋白-T(Tn-T)規(guī)格：96T/48T

冰凍切片核酸氧化8-羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)熒光染色測定試劑盒10次

RatandrogenELISA試劑盒大鼠雄激素(androgen)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
小鼠血小板活化因子(PAF)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Rat azidothymidine (AZT) ELISA Kit 大鼠疊氮胸苷(AZT)ELISA試劑盒

HumanαN-acetylglucosaminidase,αNAGELISAKit 人αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitfor(Mouseai-IVIgGaibody)ELISAKit小鼠抗IVIgG抗體規(guī)格：48T/96T

飲料乙酰舒泛(acesulfameK)含量高效液相色譜法定量檢測試劑盒20次

MouseIerleukin5,IL-5ELISAKit小鼠白介素-5(IL-5)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
RHOB(Human ras homolog gene family,memmber B) ELISA Kit 人ras同源物基因家族成員bMulti-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-PARP 多腺苷二0酸多聚酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh HOXA11 同源盒蛋白HOXA11抗體 規(guī)格 0.1ml

AhCGAb(Human anti-chorionic gonadotropin-antibody) ELISA Kit 人抗人抗體 96T

Polycystin 1 英文名稱： 多囊腎蛋白1抗體 0.2ml

CDC20B 英文名稱： 細胞分裂周期蛋白20B抗體 0.2ml

Anti-PARP 多腺苷二0酸多聚酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
總膽固醇（TC）含量微量法檢測試劑盒Anti-UG/FITC 熒光素標記子宮珠蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

CCR-7(CC chemokine receptor 7) CC趨化因子受體7(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

組織蛋白酶K抗體 Anti-cath-K/CK 0.1ml

SEPT6 英文名稱： 細胞分化蛋白SEPT6抗體 0.2ml

EML3 英文名稱： 微管相關蛋白樣蛋白3抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Histone H3 (Thr3) 0酸化組蛋白H3抗體 規(guī)格 0.1ml

CCR-7(CC chemokine receptor 7) CC趨化因子受體7(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
操作步驟：
1. 樣品的準備：
a. 細胞樣品的準備：收集細胞，用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定，可以冰浴保存；如果當天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當天完成測定。
2. 試劑盒的準備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當混勻后再使用。
b. 反應啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋，即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標準品準備：需自備SOD標準品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品，但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
3. 樣品測定：
a. 參考下表使用96孔板加入各個組分，注意設置樣品孔和各種空白對照孔。
注意：加入反應啟動工作液后反應即會開始，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應啟動工作液的時間先后差異而導致的誤差。
b. 37℃孵育30分鐘。
說明：孵育25至35分鐘檢測出來的SOD活力無顯著差異，但為保證檢測結(jié)果的一致性，推薦孵育30分鐘。
c. 450nm 測定吸光度。如無450nm 濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長作為參考波長進行雙波長測定。
4. 樣品中總SOD活力的計算：
a. 抑制百分率的計算：
參考如下計算公式計算抑制百分率：
抑制百分率＝[(A空白對照1－A空白對照2)－(A樣品－A空白對照3)] / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%
如果沒有設置空白對照3，則可以把計算公式簡化為：
抑制百分率＝(A空白對照1－A樣品) / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%
如果計算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ，則通常需要把該樣品重新測定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測定出來的抑制百分率偏高，則需適當稀釋樣品；如果測定出來的抑制百分率偏低，則需重新準備濃度較高的待測樣品。
b. SOD酶活力單位的定義：在上述化酶藕聯(lián)反應體系中抑制百分率為50% 時，反應體系中的SOD酶活力定義為一個酶活力單位 (unit)。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種，不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進行適當換算。