測(cè)定意義：
支鏈淀粉是具有高度分支的多糖，淀粉中直鏈淀粉和支鏈淀粉的比例和含量對(duì)淀粉產(chǎn)品的加工、物化特性、糊化溫度等有著直接的影響，對(duì)于不同比例直、支鏈淀粉的淀粉的研究具有重要的意義。

測(cè)定原理：

利用80％乙醇可以把樣品中可溶性糖與淀粉分開，利用雙波長(zhǎng)比色法測(cè)定支鏈淀粉含量。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰、乙醚和蒸餾水。
基本信息：
產(chǎn)品名稱：支鏈淀粉含量可見分光光度法檢測(cè)試劑盒
測(cè)試方法: 可見分光光度法
規(guī)格 : 50管/48樣
貨號(hào)：GOY-01S6676
分類：淀粉系列

試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑四：液體×1瓶，4℃避光保存，未變成藍(lán)綠色之前均可使用。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1支（EP管中），2 μmol/mL酚標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。
測(cè)定步驟：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到510 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三置于37℃水浴中預(yù)熱30 min。
3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸餾水，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A空白管。
4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管，加入4μL標(biāo)準(zhǔn)品，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
5. 對(duì)照管：取EP管，加入4μL上清液，40μL蒸餾水，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A測(cè)定管。
6. 測(cè)定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A測(cè)定管。
其中標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需做一管，測(cè)定管和對(duì)照管每個(gè)樣均需做。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

操作步驟：
1. 樣品的準(zhǔn)備：產(chǎn)品僅用于科研
a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測(cè)樣品。
b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測(cè)樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（P1511）測(cè)定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測(cè)。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測(cè)定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測(cè)定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測(cè)定。
2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測(cè)樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測(cè)緩沖液的比例進(jìn)行稀釋，即為反應(yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測(cè)中可以各取20微升，參考樣品進(jìn)行檢測(cè)。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對(duì)于SOD的檢測(cè)并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽(yáng)性對(duì)照或作為對(duì)SOD活性定量的參考。
3. 樣品測(cè)定：
a. 參考下表使用96孔板加入各個(gè)組分，注意設(shè)置樣品孔和各種空白對(duì)照孔。
注意：加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液后反應(yīng)即會(huì)開始，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液的時(shí)間先后差異而導(dǎo)致的誤差。
b. 37℃孵育30分鐘。
說明：孵育25至35分鐘檢測(cè)出來的SOD活力無顯著差異，但為保證檢測(cè)結(jié)果的一致性，推薦孵育30分鐘。
c. 450nm 測(cè)定吸光度。如無450nm 濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長(zhǎng)作為參考波長(zhǎng)進(jìn)行雙波長(zhǎng)測(cè)定。
4. 樣品中總SOD活力的計(jì)算：
a. 抑制百分率的計(jì)算：
參考如下計(jì)算公式計(jì)算抑制百分率：
抑制百分率＝[(A空白對(duì)照1－A空白對(duì)照2)－(A樣品－A空白對(duì)照3)] / (A空白對(duì)照1－A空白對(duì)照2) × 100%
如果沒有設(shè)置空白對(duì)照3，則可以把計(jì)算公式簡(jiǎn)化為：
抑制百分率＝(A空白對(duì)照1－A樣品) / (A空白對(duì)照1－A空白對(duì)照2) × 100%
如果計(jì)算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ，則通常需要把該樣品重新測(cè)定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測(cè)定出來的抑制百分率偏高，則需適當(dāng)稀釋樣品；如果測(cè)定出來的抑制百分率偏低，則需重新準(zhǔn)備濃度較高的待測(cè)樣品。
b. SOD酶活力單位的定義：在上述化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50% 時(shí)，反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個(gè)酶活力單位 (unit)。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種，不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進(jìn)行適當(dāng)換算。

小鼠Klotho蛋白(KL)ELISA試劑盒 ，英文名： KL ELISA Kit

人糖原合成酶激酶(GSK)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanglycogensyhasekinase,GSKELISAKit 96T/48T

大鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)免疫試劑盒 Rat Bone morphogenetic protein receptor Ⅱ,BMPR-Ⅱ ELISA Kit

CLIAKitforVZV-IgM(HumanVaricellazostervirusIgMELISAKit人水痘帶狀皰疹病毒IgM規(guī)格：48T/96T

羅丹明123(RHODANMINE123)溶液(50微摩爾)0.5毫升

ELISAKitIgA人免疫球蛋白A規(guī)格：48T/96T
小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子B(VEGF-B)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Rat calmon (CAM) ELISA Kit 大鼠鈣調(diào)素(CAM)ELISA試劑盒

Humanverylateappearingaigen,VLAELISAKit 人遲現(xiàn)抗原(VLA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

C3ELISA試劑盒鮭魚補(bǔ)體蛋白3規(guī)格：96T/48T

魚類受精卵細(xì)胞凍存試劑盒(低溫)50次

MouseInsulin,INSELISAKit小鼠胰島素(INS)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
Anti-Ang- II /FITC 熒光素標(biāo)記血管緊張素II抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-FANCD2/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠FANCD2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Corin 心臟特異性絲氨酸蛋白酶抗體 規(guī)格 0.2ml

Alkaline Phosphatase/ALP/AP 堿性0酸酶 1mg

KMT1A 英文名稱： 組蛋白H3 K9甲基轉(zhuǎn)移酶抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh UACA 葡萄膜自身抗原Uaca抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-FANCD2/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠FANCD2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
支鏈淀粉含量可見分光光度法檢測(cè)試劑盒Anti-VASP/FITC 熒光素標(biāo)記血管擴(kuò)張刺激0蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

CD33 peptide(human) CD33抗原(人)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

細(xì)胞表面趨化因子受體2B抗體 Anti-CCR-2B 0.1ml

S100P binding protein 英文名稱： S100P結(jié)合蛋白抗體 0.2ml

ENOSF1 英文名稱： 烯醇化酶超家族成員1抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-HER3 (Tyr1197) 0酸化HER3受體抗體 規(guī)格 0.1ml

CD33 peptide(human) CD33抗原(人)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg