細(xì)胞活力藍(lán)色熒光（DAPI）檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

細(xì)胞活力藍(lán)色熒光檢測(cè)試劑是一種旨在通過使用熒光染料DAPI與染色體DNA的結(jié)合并發(fā)出熒光檢測(cè)信號(hào)來測(cè)定活體細(xì)胞和死亡細(xì)胞之比例的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。適用于各種生長(zhǎng)中的動(dòng)物或人體細(xì)胞。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，性能穩(wěn)定，著色清晰。

技術(shù)背景

作為細(xì)胞DNA染色劑之一的4，6－二咪基－4-聯(lián)苯基吲哚（ 4，6-diamidino-2-phenylindole；DAPI）特異性地與DNA雙螺旋的凹槽部分發(fā)生相互作用，從而與DNA的雙鏈緊密結(jié)合。結(jié)合后產(chǎn)生的熒光基團(tuán)的吸收峰是358nm而散射峰是461nm，正好是UV（紫外光）的激發(fā)波長(zhǎng)356nm，使得DAPI成為了一種常用的熒光檢測(cè)信號(hào)。 

產(chǎn)品內(nèi)容

緩沖液（Reagent A）      毫升

固定液（Reagent B）    毫升

染色液（Reagent C）    微升

裂解液（Reagent D）    微升

產(chǎn)品說明書                       1份

保存方式

保存染色液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，染色液（Reagent C）避免光照，有效保證6月

用戶自備

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（G&VS12024）：用于細(xì)胞脫離

完全細(xì)胞培養(yǎng)液（G&VS12052）：用于混勻細(xì)胞的培養(yǎng)基

15毫升錐形離心管：用于細(xì)胞操作的容器

臺(tái)式離心機(jī)：用于細(xì)胞沉淀收集

1.5毫升離心管：用于細(xì)胞檢測(cè)操作的容器

熒光顯微鏡：用于觀察染色并具熒光的細(xì)胞

血細(xì)胞計(jì)數(shù)器：用于細(xì)胞計(jì)數(shù)

實(shí)驗(yàn)步驟

1． 開啟熒光顯微鏡

2． 移取25cm²細(xì)胞培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)液到新的15毫升錐形離心管（收集所有漂浮細(xì)胞）

3． 加入xx毫升緩沖液（Reagent A）到細(xì)胞培養(yǎng)瓶，清洗生長(zhǎng)中的細(xì)胞表面

4． 抽去3毫升清洗液到15毫升錐形離心管

5． 加入1毫升用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，鋪滿整個(gè)培養(yǎng)平面

6． 置入37℃培養(yǎng)箱1分種

7． 輕輕震動(dòng)培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞脫落，然后加入5毫升用戶自備的完全細(xì)胞培養(yǎng)液

8． 移入15毫升錐形離心管

9． 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為300g

10． 小心抽去上清液

11． 加入xx毫升緩沖液（Reagent A），充分混勻（注意：參見注意事項(xiàng)5）

12． 移出100微升細(xì)胞樣品到1.5毫升離心管

13． 加入xx微升固定液（Reagent B）到1.5毫升離心管

14． 用手指輕輕彈動(dòng)離心管，使其充分混勻

15． 加入xx微升染色液（Reagent C）到離心管

16． 用手指輕輕彈動(dòng)離心管，使其充分混勻

17． 移出10微升離心管中的混勻物到血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的前池

18． 加入xx微升裂解液（Reagent D）到1.5毫升離心管

19． 用手指輕輕彈動(dòng)離心管，使其充分混勻

20． 移出10微升離心管中的混勻物到血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的后池

21． 在（倒置）熒光顯微鏡（10倍）紫外波長(zhǎng)下，觀察并計(jì)數(shù)（注意：參見注意事項(xiàng)6）

22． 血細(xì)胞計(jì)數(shù)器前池樣品顯示熒光細(xì)胞核的為死亡細(xì)胞，而血細(xì)胞計(jì)數(shù)器后池樣品顯示熒光細(xì)胞核的為細(xì)胞總數(shù)

23． 確定活體細(xì)胞和死亡細(xì)胞的比例

注意事項(xiàng)

1． 本產(chǎn)品為50次操作

2． 本產(chǎn)品可用于懸浮細(xì)胞，直接從實(shí)驗(yàn)步驟8開始

3． DAPI為半通透性染料，不能染色活細(xì)胞

4． 本產(chǎn)品的裂解液（Reagent D）能夠充分溶解紅細(xì)胞，因此可用于精確計(jì)量血液中有核細(xì)胞

5． 建議待測(cè)細(xì)胞樣品最好為每毫升1 X 10⁶細(xì)胞濃度左右

6． 細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)乘上稀釋倍數(shù)10⁴。標(biāo)準(zhǔn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)器（Hemocytometer）的計(jì)算方法是：

1毫米方塊的細(xì)胞計(jì)數(shù)X 10⁴（稀釋倍數(shù)）＝實(shí)際細(xì)胞數(shù)/毫升

7． 本產(chǎn)品可直接染色生長(zhǎng)中的貼壁細(xì)胞，染色液和培養(yǎng)液比例為1：100

8． 本公司提供系列細(xì)胞繁殖和活力檢測(cè)試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰

使用承諾

極威生物秉著“信譽(yù)至上、客戶滿意、質(zhì)量承諾”的宗旨為我們的用戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨后，應(yīng)按照產(chǎn)品說明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷售前已作嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定，保證說明書所述的使用效果。在貨到后10天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問題，請(qǐng)立即以書面形式（實(shí)驗(yàn)報(bào)告）與本公司聯(lián)系，并將該產(chǎn)品退回，經(jīng)檢驗(yàn)確系產(chǎn)品質(zhì)量所致，本公司負(fù)責(zé)更換產(chǎn)品。如系使用者錯(cuò)誤操作所致，本公司不承擔(dān)由此造成的損失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

訂購(gòu)信息

單組分訂購(gòu)信息

編號(hào) 名稱 規(guī)格

G&VS10008 細(xì)胞活力藍(lán)色熒光檢測(cè)試劑盒 50次

G&VS10008A 緩沖液（Reagent A）   毫升

G&VS10008B 固定液（Reagent B） 毫升

G&VS10008C  染色液（Reagent C） 微升

G&VS10008D  裂解液（Reagent D） 毫升

G&VS12024 胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液 毫升

G&VS12052  DMEM完全細(xì)胞培養(yǎng)液 毫升

試劑盒訂購(gòu)信息

 上海極威生物科技有限公司（Shanghai JIwei Biological Technology Co., Ltd.）成立于上海，是一家專業(yè)從事“產(chǎn)品研發(fā)、市場(chǎng)銷售、技術(shù)服務(wù)”為一體的高科技生物技術(shù)公司。公司主營(yíng)產(chǎn)品有elisa試劑盒，小鼠elisa試劑盒，大鼠elisa試劑盒，植物elisa試劑盒，食品安全系列試劑盒，糖尿病系列試劑盒，細(xì)胞因子系列試劑盒，血漿相關(guān)指標(biāo)elisa試劑盒，一步法試劑盒，生化試劑盒，標(biāo)準(zhǔn)品，細(xì)胞株，生化試劑，技術(shù)服務(wù)（生化測(cè)試、液相氣相檢測(cè)、ICP-MS測(cè)試），在科學(xué)研究和醫(yī)療檢測(cè)領(lǐng)域享有良好的聲譽(yù)，經(jīng)過多年的努力發(fā)展已成為專業(yè)供應(yīng)各類生物科研用品的公司，長(zhǎng)期專注于生物領(lǐng)域，旗下產(chǎn)品種類眾多。