G&VS10014.3.2 v.A

組織樣品細(xì)胞色素C氧化酶活性測(cè)定試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)（中文版）

主要用途

組織樣品細(xì)胞色素C氧化酶活性測(cè)定試劑是一種旨在通過(guò)細(xì)胞色素C氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)中還原性細(xì)胞色素C氧化后吸光峰值的降低，即采用比色法測(cè)定樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種組織（動(dòng)物、人體、植物、昆蟲(chóng)等）裂解懸液中細(xì)胞色素C氧化酶的活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定。

技術(shù)背景

細(xì)胞色素C氧化酶（Cytochrome c oxidase）存在于真核生物的細(xì)胞線粒體上，主要通過(guò)氧化磷酸化為細(xì)胞提供能量。基于底物還原型細(xì)胞色素C（reduced cytochrome c），受到細(xì)胞色素C氧化酶的催化，轉(zhuǎn)化為氧化型細(xì)胞色素C（oxidized cytochrome c），在分光光度儀下，出現(xiàn)吸光值的變化（550nm 波長(zhǎng)），由此定量測(cè)定細(xì)胞色素C氧化酶的活性。細(xì)胞色素C氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)為：

產(chǎn)品內(nèi)容

清理液（Reagent A）  毫升

裂解液（Reagent B）  毫升

緩沖液（Reagent C）  毫升

反應(yīng)液（Reagent D）  毫升

稀釋液（Reagent E）    毫升

穩(wěn)定液（Reagent F）    微升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)     1份

保存方式

保存清理液（Reagent A）、緩沖液（Reagent C）和稀釋液（Reagent E）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里；反應(yīng)液（Reagent D）避免光照；有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于反應(yīng)液和樣品制備的容器

15毫升錐形離心管：用于樣品制備的容器

（微型）臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品操作

比色皿：用于比色的容器

分光光度儀：用于比色分析

實(shí)驗(yàn)步驟

一、 樣品準(zhǔn)備

1． 手術(shù)取出動(dòng)物組織，并秤重以確定組織重量 

2． （選擇步驟）放進(jìn)預(yù)冷的15毫升錐形離心管

3． （選擇步驟）加入適量的（500毫克組織需要xx毫升）清理液（Reagent A）清洗1次

4． 移入到一個(gè)液氮凍存管

5． 即刻放進(jìn)液氮罐過(guò)夜

6． 次日從液氮罐里取出，即刻（最快速度）用研磨棒碾碎組織成粉末狀（注意：切莫使組織凍融）

7． 放進(jìn)一個(gè)15毫升錐形離心管

8． 加入預(yù)冷的xx微升裂解液（Reagent B） 

9． 轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的1.5毫升離心管

10． 強(qiáng)力渦旋震蕩30秒，充分混勻

11． 置于冰槽里孵育30分鐘，期間每10分鐘強(qiáng)力渦旋震蕩30秒（注意：如需暫時(shí)停止，放進(jìn)－70℃冰箱里儲(chǔ)存?zhèn)溆?/font>）

12． 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）

13． 小心移取500微升上清液到新的預(yù)冷的1.5毫升離心管

14． 移取10微升進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)（注意：建議使用 Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－G&VS30030.1）

15． 即刻放進(jìn)－70℃保存或置于冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作

二、 測(cè)讀準(zhǔn)備

1． 準(zhǔn)備好待測(cè)樣品，置于冰槽里融化 

2． 設(shè)定好分光光度儀：溫度25℃，波長(zhǎng)550nm，間隔10秒，測(cè)讀7次（共60秒），并置零或設(shè)置0秒和60秒各測(cè)讀1次

3． 測(cè)定開(kāi)始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的反應(yīng)液（Reagent D）置入冰槽里融化，然后移出100微升到新的1.5毫升離心管，加入xx微升穩(wěn)定液（Reagent F），輕柔混勻后，室溫下避光靜置至少15分鐘（可見(jiàn)顏色變化），置于冰槽里，標(biāo)記為反應(yīng)工作液（注意：參見(jiàn)注意事項(xiàng)4），放在暗室里備用。然后進(jìn)行下列操作。

三、 背景對(duì)照測(cè)定

1． 移取xx微升緩沖液（Reagent C）到新的1毫升比色皿

2． 加入xx微升稀釋液（Reagent E）

3． 上下傾倒數(shù)次，混勻

4． 室溫下孵育2分鐘

5． 放進(jìn)分光光度儀，置零

6． 取出比色皿，加入xx微升含有反應(yīng)液（Reagent D）和穩(wěn)定液（Reagent F）的反應(yīng)工作液

7． 上下傾倒數(shù)次，混勻

8． 即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè)，此為背景空對(duì)照（0秒讀數(shù)－60秒讀數(shù)），

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

訂購(gòu)信息

編號(hào) 名稱(chēng) 規(guī)格

G&VS10014.3.2 組織樣品懸液細(xì)胞色素C氧化酶活性測(cè)定試劑盒 20次

G&VS10014.3.2A 清理液（Reagent A）     500毫升

G&VS10014.3.2B 裂解液（Reagent B）      100毫升

G&VS10014.3.2C 緩沖液（Reagent C）     100毫升

G&VS10014.3.2D  反應(yīng)液（Reagent D）      10毫升

G&VS10014.3.2E  稀釋液（Reagent E）      10毫升

G&VS10014.3.2F  穩(wěn)定液（Reagent F） 1毫升

G&VS30030.1  Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒 100次