G&VS10013.4 v.A

活體組織線粒體內膜功能（膜電位）熒光測定試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

活體組織線粒體內膜功能（膜電位）熒光測定試劑是一種旨在通過高度敏感的陽離子熒光羰花青染料結合到線粒體基質，其熒光的增強或減弱說明線粒體膜電位的變化，即內膜電負性的增高或降低，來分析線粒體內膜功能完整性的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種活體組織線粒體的功能檢測。可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、衰老等的研究。產品嚴格無菌，即到即用，活體檢測，操作簡易，性能穩(wěn)定。

技術背景

陽離子熒光羰花青染色劑JC-1（5,5',6,6'-tetrachloro-1,1',3,3'-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine iodide）是一種對膜電位高度敏感的染色劑。它特異性地進入線粒體，分布和結合在線粒體基質上。線粒體膜電位的高低變化決定了JC-1的分布濃度。電位高，JC-1形成聚集體，而濃度高，熒光顯色為紅色或桔紅色；反之，則為綠色。熒光減弱表明線粒體內膜功能受到損害。

產品內容

清理液（Reagent A）    毫升

染色液（Reagent B）    微升

稀釋液（Reagent C）    毫升

裂解液（Reagent D）    毫升

產品說明書    1份

保存方式

保存清理液（Reagent A）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里；染色液（Reagent B）避免光照；有效保證6月

用戶自備

24孔細胞培養(yǎng)板：用于活體組織線粒體染色的容器

DOUNCE勻漿器：用于制備組織裂解懸液

微型臺式離心機：用于組織成分的制備

培養(yǎng)箱：用于染色孵育

96孔板或比色皿：用于熒光定量分析的容器

熒光顯微鏡：用于活體組織細胞線粒體熒光定性分析

熒光分光光度儀或熒光酶標儀：用于活體組織細胞線粒體熒光定量分析

實驗步驟

實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，稀釋液（Reagent C）放進37℃恒溫水槽里預熱。然后移出xx微升染色液（Reagent B）到新的1.5毫升離心管，加入xx微升稀釋液（Reagent C），混勻后，在冰槽里靜置，并標記為染色工作液，放在暗室里。然后進行下列操作。

一、 直接法－熒光顯微鏡檢測

1． 準備1個24孔細胞培養(yǎng)板

2． 放進新鮮切除的動物組織樣本（注意：建議組織大小為0.5厘米；如果過大，最好刀切處理一下）

3． 將組織壓平

4． 小心加入xx毫升37℃預熱的清理液（Reagent A），清洗組織樣本

5． 小心抽去清理液

6． 小心加入xx微升染色工作液，浸沒整個組織

7． 放進37℃培養(yǎng)箱，孵育20分鐘，避免光照

8． 小心抽去染色液

9． 小心加入xx 37℃預熱的清理液（Reagent A），清洗組織樣本

10． 小心抽去清理液

11． 重復實驗步驟9至10二次

12． 后續(xù)切片（100微米厚）

13． 置于載波片上

14． 蓋上蓋玻片，用手指輕輕壓平

15． 即刻在熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下進行觀察（單濾波或雙濾波），通過電腦軟件分析熒光強度：

觀察紅色熒光：

觀察綠色熒光：

二、 間接法－熒光分光光度儀測定

1． 準備1個24孔細胞培養(yǎng)板

2． 放進新鮮切除的動物組織樣本（注意：建議組織大小為0.5厘米；如果過大，最好刀切處理一下）

3． 將組織壓平

4． 小心加入xx毫升37℃預熱的清理液（Reagent A），清洗組織樣本

5． 小心抽去清理液

6． 小心加入xx微升染色工作液，浸沒整個組織

7． 放進37℃培養(yǎng)箱，孵育20分鐘，避免光照

8． 小心抽去染色液

9． 小心加入xx毫升37℃預熱的清理液（Reagent A），清洗組織樣本

10． 小心抽去清理液

11． 重復實驗步驟9至10二次

12． 小心加xx毫升裂解液（Reagent D）

13． 渦旋震蕩5秒，充分混勻

14． 即刻放入預冷的DOUNCE勻漿器

15． 在冰槽里用研磨棒勻化組織（約80下） 

16． 將所有組織勻漿物移入1.5毫升離心管

17． 放進4℃微型臺式離心機離心10分鐘，速度為1500g

18． 小心移出100微升上清液到黑色96孔板里或100微升比色皿里

19． 即刻進行熒光分光光度儀或熒光酶標儀測定（單一測定或雙重測定）：

訂購信息

編號 名稱 規(guī)格

G&VS10013.4 活體組織線粒體內膜功能（膜電位）熒光測定試劑盒 10次

G&VS10013.4A 清理液（Reagent A） 500毫升

G&VS10013.4B 染色液（Reagent B）     500微升

G&VS10013.4C 稀釋液（Reagent C）      50毫升

G&VS10013.4D 清理液（Reagent D）     100毫升