G&VS10013.4 v.A

活體組織線粒體內(nèi)膜功能（膜電位）熒光測定試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

活體組織線粒體內(nèi)膜功能（膜電位）熒光測定試劑是一種旨在通過高度敏感的陽離子熒光羰花青染料結(jié)合到線粒體基質(zhì)，其熒光的增強(qiáng)或減弱說明線粒體膜電位的變化，即內(nèi)膜電負(fù)性的增高或降低，來分析線粒體內(nèi)膜功能完整性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種活體組織線粒體的功能檢測。可以被用于細(xì)胞凋亡、信號傳遞、衰老等的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，活體檢測，操作簡易，性能穩(wěn)定。

技術(shù)背景

陽離子熒光羰花青染色劑JC-1（5,5',6,6'-tetrachloro-1,1',3,3'-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine iodide）是一種對膜電位高度敏感的染色劑。它特異性地進(jìn)入線粒體，分布和結(jié)合在線粒體基質(zhì)上。線粒體膜電位的高低變化決定了JC-1的分布濃度。電位高，JC-1形成聚集體，而濃度高，熒光顯色為紅色或桔紅色；反之，則為綠色。熒光減弱表明線粒體內(nèi)膜功能受到損害。

產(chǎn)品內(nèi)容

清理液（Reagent A）    毫升

染色液（Reagent B）    微升

稀釋液（Reagent C）    毫升

裂解液（Reagent D）    毫升

產(chǎn)品說明書    1份

保存方式

保存清理液（Reagent A）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里；染色液（Reagent B）避免光照；有效保證6月

用戶自備

24孔細(xì)胞培養(yǎng)板：用于活體組織線粒體染色的容器

DOUNCE勻漿器：用于制備組織裂解懸液

微型臺式離心機(jī)：用于組織成分的制備

培養(yǎng)箱：用于染色孵育

96孔板或比色皿：用于熒光定量分析的容器

熒光顯微鏡：用于活體組織細(xì)胞線粒體熒光定性分析

熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀：用于活體組織細(xì)胞線粒體熒光定量分析

實(shí)驗(yàn)步驟

實(shí)驗(yàn)開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，稀釋液（Reagent C）放進(jìn)37℃恒溫水槽里預(yù)熱。然后移出xx微升染色液（Reagent B）到新的1.5毫升離心管，加入xx微升稀釋液（Reagent C），混勻后，在冰槽里靜置，并標(biāo)記為染色工作液，放在暗室里。然后進(jìn)行下列操作。

一、 直接法－熒光顯微鏡檢測

1． 準(zhǔn)備1個24孔細(xì)胞培養(yǎng)板

2． 放進(jìn)新鮮切除的動物組織樣本（注意：建議組織大小為0.5厘米；如果過大，最好刀切處理一下）

3． 將組織壓平

4． 小心加入xx毫升37℃預(yù)熱的清理液（Reagent A），清洗組織樣本

5． 小心抽去清理液

6． 小心加入xx微升染色工作液，浸沒整個組織

7． 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱，孵育20分鐘，避免光照

8． 小心抽去染色液

9． 小心加入xx 37℃預(yù)熱的清理液（Reagent A），清洗組織樣本

10． 小心抽去清理液

11． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟9至10二次

12． 后續(xù)切片（100微米厚）

13． 置于載波片上

14． 蓋上蓋玻片，用手指輕輕壓平

15． 即刻在熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下進(jìn)行觀察（單濾波或雙濾波），通過電腦軟件分析熒光強(qiáng)度：

觀察紅色熒光：

觀察綠色熒光：

二、 間接法－熒光分光光度儀測定

1． 準(zhǔn)備1個24孔細(xì)胞培養(yǎng)板

2． 放進(jìn)新鮮切除的動物組織樣本（注意：建議組織大小為0.5厘米；如果過大，最好刀切處理一下）

3． 將組織壓平

4． 小心加入xx毫升37℃預(yù)熱的清理液（Reagent A），清洗組織樣本

5． 小心抽去清理液

6． 小心加入xx微升染色工作液，浸沒整個組織

7． 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱，孵育20分鐘，避免光照

8． 小心抽去染色液

9． 小心加入xx毫升37℃預(yù)熱的清理液（Reagent A），清洗組織樣本

10． 小心抽去清理液

11． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟9至10二次

12． 小心加xx毫升裂解液（Reagent D）

13． 渦旋震蕩5秒，充分混勻

14． 即刻放入預(yù)冷的DOUNCE勻漿器

15． 在冰槽里用研磨棒勻化組織（約80下） 

16． 將所有組織勻漿物移入1.5毫升離心管

17． 放進(jìn)4℃微型臺式離心機(jī)離心10分鐘，速度為1500g

18． 小心移出100微升上清液到黑色96孔板里或100微升比色皿里

19． 即刻進(jìn)行熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀測定（單一測定或雙重測定）：

訂購信息

編號 名稱 規(guī)格

G&VS10013.4 活體組織線粒體內(nèi)膜功能（膜電位）熒光測定試劑盒 10次

G&VS10013.4A 清理液（Reagent A） 500毫升

G&VS10013.4B 染色液（Reagent B）     500微升

G&VS10013.4C 稀釋液（Reagent C）      50毫升

G&VS10013.4D 清理液（Reagent D）     100毫升