PKH67綠色熒光細(xì)胞mo標(biāo)記試劑盒

貨號：ZK-PL3948

品牌：子科生物/ZIKER

描述：

熒光染料PKH67適用于常規(guī)細(xì)胞o標(biāo)記，是?種可對體外和體內(nèi)細(xì)胞示蹤的綠色熒光染料，通過與膜結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)分子結(jié)合而標(biāo)記細(xì)胞。PKH67對細(xì)胞毒性較小，熒光背景低，脂溶性高，能夠輕易穿透細(xì)胞o，有著強(qiáng)而穩(wěn)定的綠色熒光。經(jīng)PKH67標(biāo)記的細(xì)胞可用于體外和體內(nèi)增殖研究，且具有不會使鄰近細(xì)胞染色的功能。在細(xì)胞分裂增殖過程中，PKH67的熒光強(qiáng)度會隨著細(xì)胞的分裂而逐級遞減，標(biāo)記熒光可平均分配至兩個子代細(xì)胞中，因此其熒光強(qiáng)度是親代細(xì)胞的半，根據(jù)這特性，它可被用于檢測細(xì)胞增殖，細(xì)胞周期的估算及細(xì)胞分裂等方面。PKH67標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均,并且分裂后的子代細(xì)胞的熒光分配也更均?。在細(xì)胞分裂增殖過程中，PKH67標(biāo)記熒光可平均分配至兩個子代細(xì)胞中，熒光強(qiáng)度變?yōu)橛H代細(xì)胞的?半，通過流式細(xì)胞儀根據(jù)熒光強(qiáng)度的不同，可檢測出未分裂細(xì)胞，分裂次(1/2 的熒光強(qiáng)度)，次(1/4 的熒光強(qiáng)度)，三次(1/8的熒光強(qiáng)度)，以及更多分裂次數(shù)的細(xì)胞。PKH67可檢測分裂次數(shù)多達(dá)六次甚至更多。除了用于細(xì)胞增殖檢測，PKH67還可以用于細(xì)胞的體外和體內(nèi)示蹤，標(biāo)記后熒光在胞內(nèi)表達(dá)穩(wěn)定，陽性標(biāo)記率達(dá)98%以上，標(biāo)記細(xì)胞形態(tài)良好，能有效地觀察細(xì)胞在體外的誘導(dǎo)分化情況；或?qū)?biāo)記的細(xì)胞注入體內(nèi)，可以有效的顯示移植細(xì)胞在活體組織中的遷移及分化。PKH67標(biāo)記的細(xì)胞用于體內(nèi)觀察可以長達(dá)數(shù)周之久，它常被用來做活體細(xì)胞檢測實(shí)驗和用熒光電鏡觀察細(xì)胞長期活動的實(shí)驗。PKH67毒性較小，不影響細(xì)胞的增殖能力。此方法操作簡單，且不用放射性同位素，不存在安全隱患?？梢愿焖?，更準(zhǔn)確和更安全地得到想要的實(shí)驗數(shù)據(jù)。由于炭尾長度過長，內(nèi)部研究已經(jīng)證明PKH67比PKH2由更少的細(xì)胞間轉(zhuǎn)移。在采用 PKH1和PKH2進(jìn)行的體內(nèi)研究中，熒光強(qiáng)度都會緩慢損失。由于這是綠色細(xì)胞linker染料而非紅色細(xì)胞linker染料出現(xiàn)的為特征，因而PKH67會出現(xiàn)類似的性質(zhì)。不分裂細(xì)胞的體外細(xì)胞o留存和體內(nèi)熒光半衰期的關(guān)聯(lián)性揭示，PKH67的體內(nèi)熒光半衰期為 10-12天。其他具有類似半衰期的綠色細(xì)胞linker染料已經(jīng)被用于監(jiān)測1-2月內(nèi)的體內(nèi) 淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞運(yùn)輸，結(jié)果表明PKH67還可用于中等時的體內(nèi)跟蹤研究。染料可以穩(wěn)定的與細(xì)胞o脂質(zhì)區(qū)結(jié)合并發(fā)出熒光，主要用于細(xì)胞體外標(biāo)記、體外細(xì)胞增殖研究以及體內(nèi)外的細(xì)胞示蹤研究。PKH67的體內(nèi)熒光半衰期為10-12天。相比于PKH-67，PKH-26具有更長的半衰期，標(biāo)記在兔紅細(xì)胞上的PKH26半衰期長達(dá)100天以上。特別適用于體外增殖研究以及長期的體內(nèi)細(xì)胞跟蹤研究。PKH67標(biāo)記細(xì)胞后通常用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞增殖檢測。

規(guī)格：

0.1ml 1ml

保存：

-20℃避光保存儲存，有效期一年。

使用說明：

一、 染色液制備：

1、取出PKH67試劑，靜置至室溫，或者37℃水浴片刻后離心，開蓋前請務(wù)必離心幾分鐘讓試劑充分落入管底后才能開蓋。

2、根據(jù)需要檢測的細(xì)胞樣品數(shù)，用稀釋液將探針10倍稀釋，再用合適的溶液(如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS)將PKH67母液25倍稀釋，配制成染色工作液。最佳工作液濃度請根據(jù)不同細(xì)胞和自身的實(shí)驗體系來調(diào)整。般細(xì)胞使用按試劑盒中的母液的終濃度250倍稀釋即可，有些細(xì)胞可能需要適當(dāng)增加濃度。

二、 細(xì)胞染色

1、將制備好的待測細(xì)胞用100ul染色工作液重懸，至細(xì)胞濃度大約107/ml。也可以進(jìn)行原位染色，染色液足夠覆蓋細(xì)胞即可。

2、在2～8℃培養(yǎng)細(xì)胞15～30分鐘，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時間不同。建議待標(biāo)記細(xì)胞在染色工作液中于37℃孵育5min，再于4℃孵育15min。低溫孵育可降低細(xì)胞對染料的內(nèi)吞作用，有助于染料對質(zhì)膜的標(biāo)記，并且降低染料定位細(xì)胞質(zhì)囊泡的可能性。

3、離心后去上清，收集細(xì)胞，用PBS或無血清培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞1-2次，最后加入PBS或無血清培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。

4、取500ul細(xì)胞懸液，用流式細(xì)胞儀檢測。Ex/Em=490/502nm。

5、隨后還可按照細(xì)胞的正常培養(yǎng)方法進(jìn)行培養(yǎng)。

注意事項：

1、PKH67標(biāo)記細(xì)胞呈綠熒光，熒光波長：λex=490 nm,λem=502nm。

2、染色濃度根據(jù)細(xì)胞種類的不同和每孔內(nèi)細(xì)胞數(shù)量的多少而異。

3、配制的PKH67母液極易水解，建議分裝保存，≦-20℃冷凍干燥保存。

4、PKH67工作液應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，不能提前配制，因為PKH67 吸水會分解，影響染色效果。

5、PKH67易被水解，在水溶液中會很快變質(zhì)。母液請在使用過程中避免接觸水。工作液在標(biāo)記細(xì)胞的過程中和水接觸是在許可的時間范圍內(nèi)的。

6、PKH67熒光染色劑為DMSO溶液，在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。可以37℃水浴片刻至全部融解后使用。

7、不同的細(xì)胞種類標(biāo)記后可以?蹤的代次或時間差異較大，請根據(jù)實(shí)際情況或參考文獻(xiàn)進(jìn)行檢測。