PKH67綠色熒光細胞mo標(biāo)記試劑盒

貨號：ZK-PL3948

品牌：子科生物/ZIKER

描述：

熒光染料PKH67適用于常規(guī)細胞o標(biāo)記，是?種可對體外和體內(nèi)細胞示蹤的綠色熒光染料，通過與膜結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)分子結(jié)合而標(biāo)記細胞。PKH67對細胞毒性較小，熒光背景低，脂溶性高，能夠輕易穿透細胞o，有著強而穩(wěn)定的綠色熒光。經(jīng)PKH67標(biāo)記的細胞可用于體外和體內(nèi)增殖研究，且具有不會使鄰近細胞染色的功能。在細胞分裂增殖過程中，PKH67的熒光強度會隨著細胞的分裂而逐級遞減，標(biāo)記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，因此其熒光強度是親代細胞的半，根據(jù)這特性，它可被用于檢測細胞增殖，細胞周期的估算及細胞分裂等方面。PKH67標(biāo)記細胞的熒光非常均,并且分裂后的子代細胞的熒光分配也更均?。在細胞分裂增殖過程中，PKH67標(biāo)記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，熒光強度變?yōu)橛H代細胞的?半，通過流式細胞儀根據(jù)熒光強度的不同，可檢測出未分裂細胞，分裂次(1/2 的熒光強度)，次(1/4 的熒光強度)，三次(1/8的熒光強度)，以及更多分裂次數(shù)的細胞。PKH67可檢測分裂次數(shù)多達六次甚至更多。除了用于細胞增殖檢測，PKH67還可以用于細胞的體外和體內(nèi)示蹤，標(biāo)記后熒光在胞內(nèi)表達穩(wěn)定，陽性標(biāo)記率達98%以上，標(biāo)記細胞形態(tài)良好，能有效地觀察細胞在體外的誘導(dǎo)分化情況；或?qū)?biāo)記的細胞注入體內(nèi)，可以有效的顯示移植細胞在活體組織中的遷移及分化。PKH67標(biāo)記的細胞用于體內(nèi)觀察可以長達數(shù)周之久，它常被用來做活體細胞檢測實驗和用熒光電鏡觀察細胞長期活動的實驗。PKH67毒性較小，不影響細胞的增殖能力。此方法操作簡單，且不用放射性同位素，不存在安全隱患?？梢愿焖伲鼫?zhǔn)確和更安全地得到想要的實驗數(shù)據(jù)。由于炭尾長度過長，內(nèi)部研究已經(jīng)證明PKH67比PKH2由更少的細胞間轉(zhuǎn)移。在采用 PKH1和PKH2進行的體內(nèi)研究中，熒光強度都會緩慢損失。由于這是綠色細胞linker染料而非紅色細胞linker染料出現(xiàn)的為特征，因而PKH67會出現(xiàn)類似的性質(zhì)。不分裂細胞的體外細胞o留存和體內(nèi)熒光半衰期的關(guān)聯(lián)性揭示，PKH67的體內(nèi)熒光半衰期為 10-12天。其他具有類似半衰期的綠色細胞linker染料已經(jīng)被用于監(jiān)測1-2月內(nèi)的體內(nèi) 淋巴細胞和巨噬細胞運輸，結(jié)果表明PKH67還可用于中等時的體內(nèi)跟蹤研究。染料可以穩(wěn)定的與細胞o脂質(zhì)區(qū)結(jié)合并發(fā)出熒光，主要用于細胞體外標(biāo)記、體外細胞增殖研究以及體內(nèi)外的細胞示蹤研究。PKH67的體內(nèi)熒光半衰期為10-12天。相比于PKH-67，PKH-26具有更長的半衰期，標(biāo)記在兔紅細胞上的PKH26半衰期長達100天以上。特別適用于體外增殖研究以及長期的體內(nèi)細胞跟蹤研究。PKH67標(biāo)記細胞后通常用流式細胞儀進行細胞增殖檢測。

規(guī)格：

0.1ml 1ml

保存：

-20℃避光保存儲存，有效期一年。

使用說明：

一、 染色液制備：

1、取出PKH67試劑，靜置至室溫，或者37℃水浴片刻后離心，開蓋前請務(wù)必離心幾分鐘讓試劑充分落入管底后才能開蓋。

2、根據(jù)需要檢測的細胞樣品數(shù)，用稀釋液將探針10倍稀釋，再用合適的溶液(如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS)將PKH67母液25倍稀釋，配制成染色工作液。最佳工作液濃度請根據(jù)不同細胞和自身的實驗體系來調(diào)整。般細胞使用按試劑盒中的母液的終濃度250倍稀釋即可，有些細胞可能需要適當(dāng)增加濃度。

二、 細胞染色

1、將制備好的待測細胞用100ul染色工作液重懸，至細胞濃度大約107/ml。也可以進行原位染色，染色液足夠覆蓋細胞即可。

2、在2～8℃培養(yǎng)細胞15～30分鐘，不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同。建議待標(biāo)記細胞在染色工作液中于37℃孵育5min，再于4℃孵育15min。低溫孵育可降低細胞對染料的內(nèi)吞作用，有助于染料對質(zhì)膜的標(biāo)記，并且降低染料定位細胞質(zhì)囊泡的可能性。

3、離心后去上清，收集細胞，用PBS或無血清培養(yǎng)基洗滌細胞1-2次，最后加入PBS或無血清培養(yǎng)基重懸細胞。

4、取500ul細胞懸液，用流式細胞儀檢測。Ex/Em=490/502nm。

5、隨后還可按照細胞的正常培養(yǎng)方法進行培養(yǎng)。

注意事項：

1、PKH67標(biāo)記細胞呈綠熒光，熒光波長：λex=490 nm,λem=502nm。

2、染色濃度根據(jù)細胞種類的不同和每孔內(nèi)細胞數(shù)量的多少而異。

3、配制的PKH67母液極易水解，建議分裝保存，≦-20℃冷凍干燥保存。

4、PKH67工作液應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，不能提前配制，因為PKH67 吸水會分解，影響染色效果。

5、PKH67易被水解，在水溶液中會很快變質(zhì)。母液請在使用過程中避免接觸水。工作液在標(biāo)記細胞的過程中和水接觸是在許可的時間范圍內(nèi)的。

6、PKH67熒光染色劑為DMSO溶液，在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。可以37℃水浴片刻至全部融解后使用。

7、不同的細胞種類標(biāo)記后可以?蹤的代次或時間差異較大，請根據(jù)實際情況或參考文獻進行檢測。