HiGeneI 轉(zhuǎn)染試劑（可替代Lipo2000、Lipo3000）

貨號：ZK-PL4121

品牌：子科生物/ZIKER

描述：HiGene是經(jīng)過特殊交聯(lián)修飾的新一代陽離子聚合物，其高密度陽離子基團與帶負電的核酸結(jié)合形成致密的納米復(fù)合物，通過內(nèi)吞入胞。在細胞內(nèi)HiGene有效緩沖內(nèi)吞小體的pH，保護核酸免受降解，并高效介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)運到胞漿胞核表達。HiGene有血清轉(zhuǎn)染效率更高，并允許細胞在鋪板時或鋪板后立即轉(zhuǎn)染，其卓越的in vitro和in vivo轉(zhuǎn)染能力堪比jetPEI、Lipofectamine 2000、Lipofectamine 3000等轉(zhuǎn)染試劑。

特點：

1、 有血清轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染前后可不更換培養(yǎng)基。

2、 細胞鋪板時立即轉(zhuǎn)染，節(jié)省時間。

3、 媲美Lipofectamine 2000, Lipofectamine 3000 。

4、 高效轉(zhuǎn)染siRNA、DNA、寡聚核苷酸。

5、 in vitro轉(zhuǎn)染細胞譜廣，包括各種原代細胞和神經(jīng)元。

6、 in vivo動物轉(zhuǎn)染，心肺腎肝脾等高效表達。

規(guī)格：0.25ml  0.5ml  1ml

儲存：4度保存，一年有效

操作步驟：

自備試劑：無菌150mM NaCl即0.9%生理鹽水或無菌蒸餾水或PBS緩沖液，用于離體細胞轉(zhuǎn)染制備轉(zhuǎn)染混合物。5%無菌葡萄糖，用于離體或在體轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)染混合物制備。與復(fù)合物顆粒形成有關(guān)，勿用其它緩沖液替代。

DNA、siRNA和寡聚核苷酸：建議溶于滅菌蒸餾水。質(zhì)粒DNA高純度OD260/280 ~1.8，無內(nèi)毒素。可用內(nèi)毒素清除劑(#D1501)清除內(nèi)毒素。寡聚核苷酸和用于RNA干擾(siRNA)的核苷酸，可單獨或與質(zhì)粒DNA共轉(zhuǎn)染，但必須使用經(jīng)HPLC或凝膠洗脫純化去除雜鏈的高純度片段。siRNA和寡聚核苷酸與DNA轉(zhuǎn)染及優(yōu)化操作相似，但對其用量進行細致的優(yōu)化很重要。

細胞準備（重要!）

接種細胞數(shù)：參見附表細胞計數(shù)接種。培養(yǎng)時間：轉(zhuǎn)染前應(yīng)培養(yǎng)~24h，使之處于分裂和旺盛生長期。細胞密度與轉(zhuǎn)染時機：培養(yǎng)~24h后，細胞覆蓋培養(yǎng)皿表面積的70~90%時為轉(zhuǎn)染最佳時機。低密度細胞的轉(zhuǎn)染率并不低，但總細胞數(shù)少因而蛋白表達總量也不會很高。在較高細胞密度時轉(zhuǎn)染較好，但100%長滿的細胞轉(zhuǎn)染效率很低，因此接種細胞要均勻，以減少因局部緊密接觸而致生長抑制的難轉(zhuǎn)染細胞，否則最好重頭接種細胞。HiGene允許在細胞鋪板時或鋪板后立即轉(zhuǎn)染，效果與貼壁后轉(zhuǎn)染相似，但大大節(jié)省時間和勞動，適合高通量篩選。甚至一些難轉(zhuǎn)染細胞也可嘗試此即時轉(zhuǎn)染方法。血清和培養(yǎng)基：HiGene具有卓越的轉(zhuǎn)染能力，血清和抗生素不影響轉(zhuǎn)染，在10~30%血清培養(yǎng)基轉(zhuǎn)染表達效率更高。轉(zhuǎn)染混合物體積為培養(yǎng)基的1/10，參見表第5欄。如果培養(yǎng)基未明顯變黃，轉(zhuǎn)染前可不更換。如轉(zhuǎn)染結(jié)果滿意，轉(zhuǎn)染后無需更換培養(yǎng)基。但轉(zhuǎn)染混合物稀釋了培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)染4~8小時后換培養(yǎng)基會可進一步增加轉(zhuǎn)染效率。

溫馨提示：

關(guān)于HiGene和DNA用量及優(yōu)化、貼壁細胞轉(zhuǎn)染、懸浮細胞轉(zhuǎn)染、動物在體in vivo轉(zhuǎn)染等詳細操作步驟下載說明書查看。