深圳子科生物科技有限公司
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HiGeneI-轉(zhuǎn)染試劑
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HiGeneI 轉(zhuǎn)染試劑(可替代Lipo2000、Lipo3000)
貨號:ZK-PL4121
品牌:子科生物/ZIKER
描述:HiGene是經(jīng)過特殊交聯(lián)修飾的新一代陽離子聚合物,其高密度陽離子基團與帶負電的核酸結(jié)合形成致密的納米復(fù)合物,通過內(nèi)吞入胞。在細胞內(nèi)HiGene有效緩沖內(nèi)吞小體的pH,保護核酸免受降解,并高效介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)運到胞漿胞核表達。HiGene有血清轉(zhuǎn)染效率更高,并允許細胞在鋪板時或鋪板后立即轉(zhuǎn)染,其卓越的in vitro和in vivo轉(zhuǎn)染能力堪比jetPEI、Lipofectamine 2000、Lipofectamine 3000等轉(zhuǎn)染試劑。
特點:
1、 有血清轉(zhuǎn)染,轉(zhuǎn)染前后可不更換培養(yǎng)基。
2、 細胞鋪板時立即轉(zhuǎn)染,節(jié)省時間。
3、 媲美Lipofectamine 2000, Lipofectamine 3000 。
4、 高效轉(zhuǎn)染siRNA、DNA、寡聚核苷酸。
5、 in vitro轉(zhuǎn)染細胞譜廣,包括各種原代細胞和神經(jīng)元。
6、 in vivo動物轉(zhuǎn)染,心肺腎肝脾等高效表達。
規(guī)格:0.25ml 0.5ml 1ml
儲存:4度保存,一年有效
操作步驟:
自備試劑:無菌150mM NaCl即0.9%生理鹽水或無菌蒸餾水或PBS緩沖液,用于離體細胞轉(zhuǎn)染制備轉(zhuǎn)染混合物。5%無菌葡萄糖,用于離體或在體轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)染混合物制備。與復(fù)合物顆粒形成有關(guān),勿用其它緩沖液替代。
DNA、siRNA和寡聚核苷酸:建議溶于滅菌蒸餾水。質(zhì)粒DNA高純度OD260/280 ~1.8,無內(nèi)毒素。可用內(nèi)毒素清除劑(#D1501)清除內(nèi)毒素。寡聚核苷酸和用于RNA干擾(siRNA)的核苷酸,可單獨或與質(zhì)粒DNA共轉(zhuǎn)染,但必須使用經(jīng)HPLC或凝膠洗脫純化去除雜鏈的高純度片段。siRNA和寡聚核苷酸與DNA轉(zhuǎn)染及優(yōu)化操作相似,但對其用量進行細致的優(yōu)化很重要。
細胞準備(重要!)
接種細胞數(shù):參見附表細胞計數(shù)接種。培養(yǎng)時間:轉(zhuǎn)染前應(yīng)培養(yǎng)~24h,使之處于分裂和旺盛生長期。細胞密度與轉(zhuǎn)染時機:培養(yǎng)~24h后,細胞覆蓋培養(yǎng)皿表面積的70~90%時為轉(zhuǎn)染最佳時機。低密度細胞的轉(zhuǎn)染率并不低,但總細胞數(shù)少因而蛋白表達總量也不會很高。在較高細胞密度時轉(zhuǎn)染較好,但100%長滿的細胞轉(zhuǎn)染效率很低,因此接種細胞要均勻,以減少因局部緊密接觸而致生長抑制的難轉(zhuǎn)染細胞,否則最好重頭接種細胞。HiGene允許在細胞鋪板時或鋪板后立即轉(zhuǎn)染,效果與貼壁后轉(zhuǎn)染相似,但大大節(jié)省時間和勞動,適合高通量篩選。甚至一些難轉(zhuǎn)染細胞也可嘗試此即時轉(zhuǎn)染方法。血清和培養(yǎng)基:HiGene具有卓越的轉(zhuǎn)染能力,血清和抗生素不影響轉(zhuǎn)染,在10~30%血清培養(yǎng)基轉(zhuǎn)染表達效率更高。轉(zhuǎn)染混合物體積為培養(yǎng)基的1/10,參見表第5欄。如果培養(yǎng)基未明顯變黃,轉(zhuǎn)染前可不更換。如轉(zhuǎn)染結(jié)果滿意,轉(zhuǎn)染后無需更換培養(yǎng)基。但轉(zhuǎn)染混合物稀釋了培養(yǎng)基,轉(zhuǎn)染4~8小時后換培養(yǎng)基會可進一步增加轉(zhuǎn)染效率。
溫馨提示:
關(guān)于HiGene和DNA用量及優(yōu)化、貼壁細胞轉(zhuǎn)染、懸浮細胞轉(zhuǎn)染、動物在體in vivo轉(zhuǎn)染等詳細操作步驟下載說明書查看。