尼羅紅脂肪熒光染色液（500X）

中文名：尼羅紅/尼爾紅

英文名：Nile Red / 9-(diethylamino)benzo[a]phenoxazin-5(5H)-one

CAS號：7385-67-3

分子式：C20H18N2O2

分子量：318.37

規(guī)格：0.2ml（500X）

儲存：-20°C避光保存，一年有效

性質：

尼羅紅不溶于水，可溶于多種有機溶劑并發(fā)出熒光，對甘油三酯，膽固醇脂具有高親和力，在疏水環(huán)境中是最理想的脂質熒光染料；尼羅紅也可以和磷脂結合，使細胞mo著色；也可染色其它疏水分子如疏水蛋白等。

特點：

1、 尼羅紅與脂滴結合后，用不同波長激發(fā)光激發(fā)，可發(fā)出不同顏色的熒光，便于觀察；

2、 尼羅紅染色后可直接觀察，不必洗滌，極大簡化了染色過程；

3、 有效避免了某些以醇為溶劑的染料在脂滴染色過程中導致的脂滴溶解融合、脂滴形態(tài)破壞等問題。

用途：

尼羅紅作為最理想的染脂熒光染料主要用于顯示組織器官的脂肪變性和類脂質的異常沉著、以及干細胞向脂肪細胞定向分化的研究。

操作步驟（供參考）：

樣本處理：

1. 冷凍切片：

（1）4%組織細胞固定液固定10min。

（2）蒸餾水洗3次，每次3min。

2. 培養(yǎng)細胞固定：

（1）4%組織細胞固定液固定10min。

（2）蒸餾水洗3次，每次3min。

3. 活細胞：用無血清和白蛋白的培養(yǎng)基洗滌細胞，除去血清和白蛋白。

染色步驟：

1. 尼羅紅染色工作液準備：臨用前，將尼羅紅脂肪熒光染色液（500X）于離心機1200rpm 離心2min，根據(jù)需要吸取適量染色液，用PBS緩沖液或無血清和白蛋白的培養(yǎng)基以1:500一次性稀釋即為尼羅紅染色工作液。

2. 固定細胞：入尼羅紅染色工作液，染色5-10分鐘，蒸餾水洗滌一次，立即觀察。（選擇恰當?shù)娜旧珪r間避免背景染色，一般情況下，染色時間>30分鐘，背景彌散強）

3. 活細胞：將尼羅紅脂肪熒光染色液（500X）直接加入無血清培養(yǎng)液中（建議稀釋比例1:500），染色5-10分鐘，收集細胞，用PBS洗滌一次，立即觀察。

波長參考：

注：請下載pdf版說明書查閱圖片。
染色結果：

（1）用365nm波長激發(fā)，細胞核為藍色，脂滴為黃色（圖C）

（2）用492-577nm波長激發(fā)，細胞呈紅色，且無變形（圖B）

（3）用435nm波長激發(fā)，細胞呈綠色，分辨率高（圖A）

注：請下載pdf版說明書查閱圖片。

說明：

1. 尼羅紅母液需要在-20℃密閉避光保存。

2. 首次使用試劑時建議先取1-2個樣品做預實驗，選擇恰當?shù)娜旧珪r間避免背景染色（如果背景過強，可提高稀釋度）。一般情況下，染色時間>30分鐘，背景彌散強。

3. 甲醛固定對染色效果無影響，但可減緩尼羅紅熒光衰減。4℃保存數(shù)天仍可見熒光。

4. 可以尼羅紅和hochest雙染，建議比例Hochest  1：200 染色20分鐘。

5. 也有文獻報道，激發(fā)光515-560nm，也可發(fā)出紅色熒光。

6. 尼羅紅在大多數(shù)疏水溶劑中時，可采用487-489nm的激發(fā)波長和530-550 nm的發(fā)射

波長。當其染磷脂時，激發(fā)光549nm, 發(fā)射光628nm。通常中性脂滴在激發(fā)光波長為515、530、560nm時多顯示金黃色，磷脂多的脂滴和亞細胞結構顯橙色在波長大于>528 nm時呈橙色，波長大于630nm時呈紅色。