實(shí)時(shí)熒光定量PCR：

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的局限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的：

1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí)，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對數(shù)期），此時(shí)微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性極好，即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增，得到的Ct值是恒定的。

2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定，因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。

外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確，重現(xiàn)性最好的定量方法，已得到全世界的公認(rèn)，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。

參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：腺病毒A型探針法熒光定量PCR試劑盒說明書

英文名稱：Adenovirus(AV)

貨號: GOY-M3635

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品及特點(diǎn):

是從土壤農(nóng)桿菌 CP4 菌株中分離得到的抗除草劑草甘膦基因，是轉(zhuǎn)基因植物研究中最為常用的一種篩選標(biāo)記基因，因此本公司根據(jù)探針法 qPCR 原理開發(fā)了專門用于檢測 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2. 根據(jù) 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物和探針，能專一性地檢測出樣品中的

鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分，但不能檢測其他非 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 一管式閉管操作，降低了交叉污染。

5. 快速，整個(gè)檢測過程（按一個(gè)樣品計(jì)）所需時(shí)間僅為 2.0 小時(shí)。

6. 本只能用于科研，足夠 50 次 20uL 體系的探針法熒光定量 PCR。

操作步驟：

下列圖示以Venor Gem OneStep 支原體 常規(guī)PCR 檢測試劑盒 (一步法)，具體產(chǎn)品操作以說明書為準(zhǔn)。

第1步：樣本處理：

第2步：試劑制備：

第3步：PCR體系建立：

第4步：啟動PCR反應(yīng)

第5步：電泳結(jié)果分析

191bp為內(nèi)控對照條帶，表明PCR反應(yīng)正常。

當(dāng)樣本存在支原體污染時(shí)，由于內(nèi)控對照與支原體DNA存在競爭，內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ɡ缰гwDNA＞103拷貝）。

陽性對照中支原體DNA＞104拷貝，內(nèi)控對照條帶會完全消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶，此條帶不影響檢測結(jié)果。

如果待測樣本對PCR產(chǎn)生抑制，則內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ê完幮詫φ障啾龋?，此時(shí)應(yīng)先進(jìn)行DNA抽提（推薦使用：Venor Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒），然后再檢測。

使用方法：

腺病毒A型探針法熒光定量PCR試劑盒說明書一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。

2. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個(gè)樣品，必須設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽性對照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。

三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）

10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對照，6個(gè)用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。

11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）

fTolvaptan  中文名：托伐普坦  分子式：C26H25ClN2O3    勻漿制作或抽提   Homogenate production or exaction

Toltrazuril  中文名：托曲珠利  分子式：C18H14F3N3O4S    （皮膚骨骼肌腸肌肉等難勻特殊樣品）   (the skin and skeletal muscle and other hard uniform special sample)

Tolazoline hydrochloride  中文名：鹽酸妥拉唑林  分子式：C10H13ClN2    超氧化物歧化酶（SOD）檢測   Superoxide dismase (SOD) detection

Tokinolide B  中文名：  分子式：C24H28O4    二（MDA）檢測   Malondialdehyde (MDA) detection              

Tofacitinib citrate  中文名：枸櫞酸托法替尼  分子式：C22H28N6O8    載脂蛋白B（ApoB）測定試劑盒（比濁法）

組織KSHV(KAPOSISARCOMA-ASSOCIATEDHERPESVIRUS)病毒定量PCR擴(kuò)增檢測試劑盒20次  1-Benzyl L-aspartate  7362-93-8  中文名：L-天冬氨酸1-芐酯  分子式：C11H13NO4  度：98.0%   

組織JNK3激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次  1-Benzyl-1H-indazol-3-ol  中文名：1-芐基-1H-吲唑-3-醇  分子式：C14H12N2O  度：98.0%

組織JNK2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次  1-Benzylimidazole  4238-71-5  中文名：1-芐基咪唑  分子式：C10H10N2  度：98.0%   

組織JNK1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次  1-Chloro-6-(5-(prop-1-ynyl)thiophen-2-yl)hexa-3,5-diyn-2-ol  中文名：  分子式：C13H9ClOS  度：97.0%

組織JAK3激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次  1-Chloroethyl cyclohexyl carbonate  99464-83-2  中文名：  分子式：C9H15ClO3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：

Abiraterone acetate  中文名：乙酸阿比特龍酯  分子式：C26H33NO2  度：98.0%  肝素抗凝管   Heparin aicoagula tube              

Esomeprazole sodium  中文名：埃索美拉唑鈉  分子式：C17H19N3NaO3S  度：98.0%  脫脂奶粉   100g

Clevidipine butyrate  中文名：丁酸氯維地平  分子式：C21H23Cl2NO6  度：98.0%  Skimmilk   500g

Azilsartan  中文名：阿齊沙坦  分子式：C25H20N4O5  度：98.0%  超氧化物歧化酶   30KU

1-Methyl-5-amino-1H-benzimidazole-2-butanoic acid ethyl ester  中文名：  分子式：C14H19N3O2  度：98.0%  SOD   3KU

腺病毒A型探針法熒光定量PCR試劑盒說明書兔子可溶性CD40配體elisa試劑盒   兔子可溶性CD40配體試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子可溶性CD40配體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子可溶性CD40配體試劑盒、兔子可溶性CD40配體elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。     8-Hydroxy-7-iodo-5-quinolinesulfonic acid  中文名：喹方  分子式：C9H6INO4S 

兔子可溶性CD40配體(sCD40L)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  7-Chloro-1,2,3,4-tetrahydrobenzo[b]azepin-5-one  160129-45-3  中文名：  分子式：C10H10ClNO 

兔子抗中性粒細(xì)胞顆粒抗體elisa試劑盒   兔子抗中性粒細(xì)胞顆?？贵w試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子抗中性粒細(xì)胞顆粒抗體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子抗中性粒細(xì)胞顆粒抗體試劑盒、兔子抗中性粒細(xì)胞顆?？贵welisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  7α-Hydroxystigmasterol  64998-19-2  中文名：7α-羥基豆甾醇  分子式：C29H48O2 

兔子抗中性粒細(xì)胞顆?？贵welisa試劑盒   兔子抗中性粒細(xì)胞顆?？贵w試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子抗中性粒細(xì)胞顆?？贵w試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子抗中性粒細(xì)胞顆粒抗體試劑盒、兔子抗中性粒細(xì)胞顆?？贵welisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  7α-Hydroxysitosterol  34427-61-7  中文名：7α-羥基谷甾醇  分子式：C29H50O2 

兔子抗中性粒細(xì)胞顆?？贵w(ANGA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  7α-Methoxy-5α,6α-epoxyergosta-8(14),22-dien-3β-ol  中文名：  分子式：C29H46O3  度：97.5%

服務(wù)流程：

1、根據(jù)客戶提供的基因序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針（染料法只需設(shè)計(jì)引物）

2、抽提DNA、RNA，并對RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄

3、實(shí)時(shí)熒光定量PCR

4、提供完整的實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)告(檢測數(shù)據(jù)、溶解曲線、擴(kuò)增曲線)

5、返還樣品（引物、RNA和cDNA）