PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實(shí)現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡介：實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

fRepaglinide  中文名：瑞格列奈  分子式：Repaglinide    植物生長激素（GH）ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Rengyol  中文名：連翹環(huán)己醇  分子式：C8H16O3    植物凝脂酸（PA）ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Rengynic acid  中文名：  分子式：C8H14O4    植物吲哚乙酸（IAA）ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

Rebeprazole sodium  中文名：雷貝拉唑鈉  分子式：C18H20N3NaO3S    植物血球凝集素M   10mg

Rasagiline mesylate  中文名：甲磺酸雷沙吉蘭  分子式：3S    PHA-M   25mg

豬乙酰膽堿(ACh)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           S-2-Benzothiazolyl2-amino-alpha-(methoxyimino)-4-thiazolethiolacetate  80756-85-0  中文名：AE活性酯  分子式：C13H10N4O2S3 

豬乙酰膽堿(ACh)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Stigmasta-4,22-dien-3-one  55722-32-2  中文名：豆甾-4,22-二烯-3-酮  分子式：C29H46O  度：%  關(guān)鍵詞：  海棗; 豆甾烷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

豬胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白elisa試劑盒   豬胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豬胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白試劑盒、豬胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  Solanesol  13190-97-1  中文名：茄尼醇  分子式：C45H74O  度：%  關(guān)鍵詞：  抗氧化; 抗菌; 煙草; 中藥對照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

豬胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白Ⅱ（IGFBP-Ⅱ）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Sarafloxacin hydrochloride  中文名：鹽酸沙拉沙星  分子式：C20H18ClF2N3O3  度：98.0%

豬胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3elisa試劑盒   豬胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豬胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3試劑盒、豬胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。     Solanesol  13190-97-1  中文名：茄尼醇  分子式：C45H74O

Lamivudine  中文名：拉米夫定  分子式：3O3S  度：98.0%  兔子氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Stavudine  中文名：司他夫定  分子式：C10H12N2O4  度：98.0%  兔子補(bǔ)體蛋白4(C4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Albendazole  中文名：阿苯達(dá)唑  分子式：C12H15N3O2S  度：98.5%  兔子血小板衍生生長因子(PDGF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Fmoc-O-(benzylphospho)-L-threonine  中文名：Fmoc-蘇氨酸磷酸芐酯  分子式：C26H26NO8P  度：98.0%  兔過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

8-Phenyloctanol  中文名：8-苯基辛醇  分子式：C14H22O  度：98.0%  兔子血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

十二指腸鉤口線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒圖片兔子Ⅰ型膠原(ColⅠ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  6-Amino-1-methyl-5-nitrosouracil  6972-78-7  中文名：  分子式：C5H6N4O3 

兔轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              5α-Androstanedione  中文名：5α-雄甾烷二酮  分子式：C19H28O2 

兔轉(zhuǎn)化生長因子-β1(rabbit TGF-b1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  4-Chlorodehydromethyltestosterone  中文名：4-氯去氫甲基睪酮  分子式：C20H27ClO2  度：98.0%

兔轉(zhuǎn)化生長因子-b2(rabbit TGF-b2)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝     4-Chlorodehydromethyltestosterone  中文名：4-氯去氫甲基睪酮  分子式：C20H27ClO2 

兔轉(zhuǎn)化生長因子-a(rabbit TGF-a)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  4-Chlorotestosterone acetate  855-19-6  中文名：醋酸氯睪酮  分子式：C21H29ClO3

注意事項(xiàng)：

十二指腸鉤口線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒圖片1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。