PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度的變化來(lái)對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針?lè)?。通過(guò)對(duì)DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測(cè), 實(shí)現(xiàn)基因的相對(duì)定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡(jiǎn)介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國(guó)Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問(wèn)題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L(zhǎng)基因序列。

（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來(lái)源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷(xiāo)產(chǎn)品產(chǎn)品：

fPanaxydiol  中文名：  分子式：C17H24O2    人葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Palmitone  中文名：棕櫚酮  分子式：C31H62O    人胰島素原(PI)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Oxytetracycline hydrochloride  中文名：鹽酸土霉素  分子式：C22H25ClN2O9    人胰島素受體β(ISR-β)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

Oxymetholone  中文名：康復(fù)龍  分子式：C21H32O3    中文名稱   方法   規(guī)格

Oxiracetam  中文名：奧拉西坦  分子式：C6H10N2O3    人瘦素受體(LEPR)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

豬特定基因序列(Porcine)核酸檢測(cè)試劑盒   48T                 Roflumilast  162401-32-3  中文名：羅氟司特  分子式：C17H14Cl2F2N2O3 

豬髓0脂堿性蛋白elisa試劑盒   豬髓0脂堿性蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬髓0脂堿性蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬髓0脂堿性蛋白試劑盒、豬髓0脂堿性蛋白elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Sitafloxacin  中文名：西他沙星  分子式：C19H18ClF2N3O3  度：98.5%

豬髓0脂堿性蛋白(MBP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Sibiricose A1  139726-40-2  中文名：6'-芥子?；崽?/span>  分子式：C23H32O15 

豬髓0脂堿性蛋白(MBP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Stigmastane-3β,5α,6β-triol  中文名：豆甾-3β,5α,6β-三醇  分子式：C29H52O3  度：96.5%

豬水通道蛋白4（AQP4）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Sitagliptin phosphate  中文名：無(wú)水磷酸西他列汀  分子式：C16H18F6N5O5P  度：98.0%

Mumeose K  中文名：  分子式：C25H32O15  度：93.0%  兔子腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Neochlorogenic acid methyl ester  中文名：新綠原酸甲酯  分子式：C17H20O9  度：97.5%  兔子腦素/腦尿肽(BNP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Ethyl 3,5-di-O-caffeoylquinate  中文名：3,5-二咖啡?？鼘幩嵋阴?/span>  分子式：C27H28O12  度：98.0%  兔子內(nèi)皮抑素(ES)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

3-O-(6'-O-Galloyl)-β-D-glucopyranosylmaltol  中文名：  分子式：C19H20O12  度：97.5%  兔子內(nèi)皮型合成酶3(eNOS-3)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Falcarindiol  中文名：  分子式：C17H24O2  度：97.0%  兔子腦素/腦尿肽(BNP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

寄生曲霉探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒圖片兔纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  5-Benzyl N-(tert-butoxycarbonyl)-L-glutamate  13574-13-5  中文名：N-(叔丁氧羰基)-L-谷氨酸-5-芐酯  分子式：C17H23NO6  度：98.0%   

兔纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  6-Benzyloxypurine  中文名：6-芐氧基嘌呤  分子式：C12H10N4O  度：98.0%

兔細(xì)胞間粘附分子1（ICAM-1）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  5-Benzyl N-(tert-butoxycarbonyl)-L-glutamate  13574-13-5  中文名：N-(叔丁氧羰基)-L-谷氨酸-5-芐酯  分子式：C17H23NO6 

兔細(xì)胞間粘附分子-1 (rabbit ICAM-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  5-Benzyl L-glutamate  1676-73-9  中文名：L-谷氨酸5-芐酯  分子式：C12H15NO4  度：98.0%   

兔透明質(zhì)酸(rabbit HA)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  5,6-Dimethyl-2-Benzothiazolamine  中文名：5,6-二甲基-2-苯并噻唑胺  分子式：C9H10N2S  度：98.0%

注意事項(xiàng)：

寄生曲霉探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒圖片1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。