PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度的變化來(lái)對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針?lè)?。通過(guò)對(duì)DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測(cè), 實(shí)現(xiàn)基因的相對(duì)定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡(jiǎn)介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國(guó)Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問(wèn)題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L(zhǎng)基因序列。

（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來(lái)源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

fMequindox  中文名：乙酰甲喹  分子式：C11H10N2O3    豬白介素6(IL-6)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Mepivacaine  中文名：甲哌卡因  分子式：C15H22N2O    豬白介素4(IL-4)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Menthyl-5-(4-amino-2-oxo-2H-pyrimidin-1-yl)-[1,3]oxathiolane-2-carboxylic acid  中文名：  分子式：C18H27N3O4S    豬補(bǔ)體蛋白3(C3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Memantine hydrochloride  中文名：鹽酸美金剛胺  分子式：C12H22ClN    豬骨鈣素/骨谷酸蛋白(OT/BGP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Megestrol acetate  中文名：醋酸甲地孕酮  分子式：C24H32O4    豬上腺素(EPI)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

豬骨鈣素elisa試劑盒   豬骨鈣素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬骨鈣素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬骨鈣素試劑盒、豬骨鈣素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Sulfaclozine  102-65-8  中文名：磺胺氯吡嗪  分子式：C10H9ClN4O2S  度：99.0%   

豬骨鈣素/骨谷酸蛋白(OT/BGP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Telmisartan  中文名：替米沙坦  分子式：C33H30N4O2 

豬弓形蟲(TOX)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?/span>)   48T  Stigmasta-4,22-diene-3β,6β-diol  167958-89-6  中文名：  分子式：C29H48O2  度：97.5%  關(guān)鍵詞：  豆甾烷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)

豬弓形蟲(TOX)核酸檢測(cè)試劑盒   48T                 Stigmasta-4,22-diene-3β,6β-diol  167958-89-6  中文名：  分子式：C29H48O2 

豬睪elisa試劑盒   豬睪試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬睪試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬睪試劑盒、豬睪eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。     Sulfaclozine  102-65-8  中文名：磺胺氯吡嗪  分子式：C10H9ClN4O2S

Echinoynethiophene A  中文名：  分子式：C13H10O2S  度：98.5%  兔載脂蛋白A1(apo-A1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Allitol  中文名：蒜糖醇  分子式：C6H14O6  度：%  兔纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

2-(2'-Hydroxytetracosanoylamino)-octadecane-1,3,4-triol  中文名：  分子式：C42H85NO5  度：96.0%  兔纖溶抑制因子/凝血酶激活的纖溶抑制物(TAFI)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

3-Methoxyfuran  中文名：  分子式：C5H6O2  度：99.0%  兔子白介素3(IL-3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Soyacerebroside I  中文名：  分子式：C40H75NO9  度：95.0%  兔子白介素1β(IL-1β)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

幼蟲芽胞桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒運(yùn)輸兔固（ALD）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  5-Aminoindazole  中文名：5-氨基吲唑  分子式：C7H7N3  度：98.0%

兔骨形成蛋白(BMPs)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  4-Hydroxysapriparaquinone  120278-25-3  中文名：  分子式：C20H26O4  度：%  關(guān)鍵詞：  紅根草; 二萜醌; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)

兔骨退化特異性標(biāo)志物CTX-2抗體elisa試劑盒   兔骨退化特異性標(biāo)志物CTX-2抗體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔骨退化特異性標(biāo)志物CTX-2抗體試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔骨退化特異性標(biāo)志物CTX-2抗體試劑盒、兔骨退化特異性標(biāo)志物CTX-2抗體elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  4-Hydroxy-4-(methoxycarbonylmethyl)cyclohexanone  81053-14-7  中文名：  分子式：C9H14O4  度：%  關(guān)鍵詞：  千里光; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)

兔骨橋素(OPN)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  4-Hydroxy-2-(3-methoxypropyl)-3,4-dihydro-2H-thieno[3,2-e][1,2]thiazine-6-sulfonamide 1,1-dioxide  154127-42-1  中文名：  分子式：C10H16N2O6S3  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

兔骨堿性0酸酶(rabbit BALP)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝     6-(5-Chloropyridin-2-yl)-7-hydroxy-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[3,4-b]pyrazin-5-one  中文名：  分子式：C11H7ClN4O2

注意事項(xiàng)：

幼蟲芽胞桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒運(yùn)輸1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。