PCR實驗方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

箭毒蛙壺菌探針法熒光定量PCR試劑盒圖片熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應進行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務：

簡介：實時熒光定量PCR技術于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉錄成cDNA。

（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結果分析。

（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標準：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

fHemapolin  中文名：甲基環(huán)硫雄醇中間體 E  分子式：C20H32OS    豬中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白(NGAL)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Gynuramide II  中文名：  分子式：C42H83NO5    豬脂聯(lián)素(ADP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Guaiacol glycidyl ether  中文名：  分子式：C10H12O3    豬脂蛋白α(Lp-α)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Griseofulvin  中文名：灰黃霉素  分子式：C17H17ClO6    豬基質金屬蛋白酶9elisa試劑盒   豬基質金屬蛋白酶9試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豬基質金屬蛋白酶9試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：豬基質金屬蛋白酶9試劑盒、豬基質金屬蛋白酶9eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

Gracillin  中文名：纖細薯蕷皂苷  分子式：C45H72O17    豬黑色素瘤轉移表面黏附分子elisa試劑盒   豬黑色素瘤轉移表面黏附分子試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豬黑色素瘤轉移表面黏附分子試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：豬黑色素瘤轉移表面黏附分子試劑盒、豬黑色素瘤轉移表面黏附分子eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

豬白介素6(IL-6)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Tenacigenoside A  中文名：  分子式：C35H56O12 

豬白介素-5(IL-5)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Stigmast-5-ene-3β,7α,16β-triol  中文名：  分子式：C29H50O3  度：93.0%

豬白介素4elisa試劑盒   豬白介素4試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豬白介素4試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：豬白介素4試劑盒、豬白介素4 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  Sitafloxacin  中文名：西他沙星  分子式：C19H18ClF2N3O3 

豬白介素4(IL-4)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Telmisartan tert-butyl ester  144702-26-1  中文名：  分子式：C37H38N4O2 

豬白介素4(IL-4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Tenacigenoside A  920502-42-7  中文名：  分子式：C35H56O12  度：%  關鍵詞：  孕甾烷; 甾苷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

(S)-4-Methoxydalbergione  中文名：(S)-4-甲氧基黃檀醌  分子式：C16H14O3  度：98.0%  兔乙酰膽堿(ACh)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Dehydroherbarin  中文名：  分子式：C16H14O5  度：96.0%  兔合成酶(NOS)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Herbarin  中文名：  分子式：C16H16O6  度：97.0%  兔氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Colelomycerone A  中文名：  分子式：C17H18O6  度：98.0%  兔血小板衍生生長因子(PDGF)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Herbaridine B  中文名：  分子式：C17H20O6  度：%  兔胰島素樣生長因子1(rabbit IGF-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

箭毒蛙壺菌探針法熒光定量PCR試劑盒圖片兔8-異構前列腺素(8-epi-PGF2α)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  4-Aminosalicylic acid  65-49-6  中文名：4-氨基水楊酸  分子式：C7H7NO3  度：98.0%   

兔6前列腺素F1aelisa試劑盒   兔6前列腺素F1a試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔6前列腺素F1a試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔6前列腺素F1a試劑盒、兔6前列腺素F1a elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。     4-Benzyloxyindole  中文名：4-芐氧基吲哚  分子式：C15H13NO 

兔6前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  4-Amino-N-methylbenzamide  6274-22-2  中文名：4-氨基-N-甲基苯甲酰胺  分子式：C8H10N2O  度：98.0%   

兔6前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  4-Aminohippuric acid  61-78-9  中文名：4-氨基馬尿酸  分子式：C9H10N2O3  度：98.0%   

兔3型膠原   英文名稱：   Rabbit Collagen Type 3   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   C-3  4-Oxododecanedioic acid  中文名：  分子式：C12H20O5  度：95.0%

注意事項：

1．基礎程序；

2．擴增溫度和延伸溫度；

3．反應時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應液的配制；

6．PCR技術的基本原理；

7．PCR的反應動力學；

8．PCR擴增產(chǎn)物；

9．PCR反應體系與反應條件。點擊了解更公司產(chǎn)品。