PCR實驗方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應(yīng)進(jìn)行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡介：實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實驗皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實驗，進(jìn)行實驗結(jié)果分析。

（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

fFosaprepitant dimeglumine  中文名：  分子式：C30H40F7N6O10P    豬髓0脂堿性蛋白(MBP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Formestane  中文名：福美司坦  分子式：C19H26O3    豬生長激素釋放多肽(GHRP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

Folic acid  中文名：葉酸  分子式：C19H19N7O6    豬可溶性細(xì)胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Fmoc-O-(benzylphospho)-L-threonine  中文名：Fmoc-蘇氨酸磷酸芐酯  分子式：C26H26NO8P    豬可溶性P選擇素(sP-Selectin)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Fluoronaphthalene  中文名：  分子式：C10H7F    豬抗凝血酶受體(A)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

豬白介素10(IL-10)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Tenacissoside I  191729-44-9  中文名：通關(guān)藤苷I  分子式：C44H62O14  度：%  關(guān)鍵詞：  通關(guān)藤; 孕甾烷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

豬白介素1(IL-1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Tenacissoside I  191729-44-9  中文名：通關(guān)藤苷I  分子式：C44H62O14 

豬白介素1(IL-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Tenuifoliside A  中文名：遠(yuǎn)志蔗糖酯A  分子式：C31H38O17  度：95.0%

豬γ干擾素elisa試劑盒   豬γ干擾素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豬γ干擾素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬γ干擾素試劑盒、豬γ干擾素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。     Tenacissoside G  191729-43-8  中文名：通關(guān)藤苷G  分子式：C42H64O14 

豬γ干擾素   英文名稱：   Porcine γ Ierferon   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   γ IFN  Temozolomide  85622-93-1  中文名：替莫唑胺  分子式：C6H6N6O2  度：99.0%

Ergosterol glucoside  中文名：麥角甾醇葡萄糖苷  分子式：C34H54O6  度：97.5%  兔血清總補體(CH50)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Phyperunolide E  中文名：  分子式：C28H40O9  度：98.0%  兔血清(NO)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Withanolide C  中文名：醉茄內(nèi)酯C  分子式：C28H39ClO7  度：97.5%  兔血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Physapruin A  中文名：  分子式：C28H38O7  度：96.5%  兔血凝素樣氧化低密度脂蛋白受體1   英文名稱：   Rabbit Lctin like oxLDL Receptor 1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   LOX-1

4β-Hydroxywithanolide E  中文名：4β-羥基醉茄內(nèi)酯E  分子式：C28H38O8  度：98.0%  兔脂氧合酶同工酶   英文名稱：   Rabbit Lipoxygenase Isozymes   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   LOXI

兩岐雙岐桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒運輸土壤堿性0酸酶（S-AKP/ALP）試劑盒   可見分光光度法   50管/48樣              4-Amino-3-hydroxybenzoic acid  中文名：4-氨基-3-羥基苯甲酸  分子式：C7H7NO3 

土壤堿性0酸酶（S-AKP/ALP）測試盒   可見分光光度法   50管/48樣  4-Aminobenzophenone  1137-41-3  中文名：4-氨基二苯甲酮  分子式：C13H11NO 

土壤還原酶（S-）測試盒   可見分光光度法   50管/24樣  4-Amino-3-hydroxy-1-naphthalenesulfonic acid  中文名：4-氨基-3-羥基-1-萘磺酸  分子式：C10H9NO4S  度：98.0%

土壤多酚氧化酶（PPO）測試盒   可見分光光度法   50管/48樣              4-Amino-3,5-dichloropyridine  中文名：  分子式：C5H4Cl2N2 

土壤銨態(tài)氮測試盒   可見分光光度法   50管/48樣  Triamcinolone acetonide  中文名：曲安奈德  分子式：C24H31FO6

注意事項：

兩岐雙岐桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒運輸1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；

8．PCR擴增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點擊了解更公司產(chǎn)品。