實時熒光定量PCR：

實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：

1）Ct值的重現性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數時，剛剛進入真正的指數擴增期（對數期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現性極好，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。

2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。

外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現性最好的定量方法，已得到全世界的公認，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。

參數規(guī)格：

產品名稱：斑點叉尾鮰病毒探針法熒光定量PCR試劑盒圖片

英文名稱：Channel Catfish Virus(CCV)

貨號: GOY-M3820

產品規(guī)格：50T

產品運輸：低溫運輸

產品保存：-20℃保存

產品有效期：一年

產品及特點:

是從土壤農桿菌 CP4 菌株中分離得到的抗除草劑草甘膦基因，是轉基因植物研究中最為常用的一種篩選標記基因，因此本公司根據探針法 qPCR 原理開發(fā)了專門用于檢測 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 的試劑盒，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2. 根據 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 保守區(qū)域設計引物和探針，能專一性地檢測出樣品中的

鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分，但不能檢測其他非 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 一管式閉管操作，降低了交叉污染。

5. 快速，整個檢測過程（按一個樣品計）所需時間僅為 2.0 小時。

6. 本只能用于科研，足夠 50 次 20uL 體系的探針法熒光定量 PCR。

操作步驟：

下列圖示以Venor Gem OneStep 支原體 常規(guī)PCR 檢測試劑盒 (一步法)，具體產品操作以說明書為準。

第1步：樣本處理：

第2步：試劑制備：

第3步：PCR體系建立：

第4步：啟動PCR反應

第5步：電泳結果分析

191bp為內控對照條帶，表明PCR反應正常。

當樣本存在支原體污染時，由于內控對照與支原體DNA存在競爭，內控對照條帶變弱（例如支原體DNA＞103拷貝）。

陽性對照中支原體DNA＞104拷貝，內控對照條帶會完全消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶，此條帶不影響檢測結果。

如果待測樣本對PCR產生抑制，則內控對照條帶變弱（和陰性對照相比），此時應先進行DNA抽提（推薦使用：Venor Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒），然后再檢測。

使用方法：

一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。

2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒DNA提取試劑盒兼容。

三、設置qPCR反應（20 μL體系，在樣品制備室進行）

10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應設置數量相應增加2或3倍。

11. 產品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）

f4β-Hydroxywithanolide E  中文名：4β-羥基醉茄內酯E  分子式：C28H38O8    植物二(MDA)測定試劑盒(比色法)

4-Oxododecanedioic acid  中文名：  分子式：C12H20O5    維生素E（VitaminE）測定試劑盒（比色法）

4-O-(3-nitropropanoyl)corollin  中文名：  分子式：C18H24N4O18    超微量Na+K+–ATP酶測定試劑盒                 

4-Methylamino-3-nitrobenzoic acid  中文名：  分子式：C8H8N2O4    氧化酶（XOD）測試盒   紫外分光光度法   50管/48樣

4-Methyl-2-propyl-1H-benzimidazole-6-carboxylic acid  中文名：  分子式：C12H14N2O2    葡萄糖氧化酶（GOD）測試盒   可見分光光度法   50管/48樣

小鼠組織因子途徑抑制物(TFPI)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Periplocoside N  39946-41-3  中文名：  分子式：C27H44O6 

小鼠組織因子途徑抑制物(TFPI)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Nicarbazin  中文名：尼卡巴嗪  分子式：C19H18N6O6  度：99.0%

小鼠組織因子(mouse TF)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  Methenolone enanthate  303-42-4  中文名：美替諾龍庚酸酯  分子式：C27H42O3  度：98.0%  關鍵詞： 

小鼠組織因子   英文名稱：   tissue factor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   TF  Daturataturin A  中文名：  分子式：C34H48O10 

小鼠組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Nevirapine  中文名：奈偉拉平  分子式：C15H14N4O  度：98.0%

Atrazine  1912-24-9  中文名：阿特拉津  分子式：C8H14ClN5    山羊白介素2受體(IL-2R)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

D(-)-Arginine  157-06-2  中文名：D-精氨酸  分子式：C6H14N4O2    山羊白介素2(IL-2)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Benserazide hydrochloride  14919-77-8  中文名：鹽酸芐絲肼  分子式：C10H16ClN3O5    山羊白介素10(IL-10)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Trenbolone heptanoate  N  中文名：  分子式：C25H34O3    山羊γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

3H-1,2-Benzodithiol-3-one-1,1-dioxide  66304-01-6  中文名：3H-1,2-苯并二硫醇-3-酮-1,1-二氧化物  分子式：C7H4O3S2    山羊β內啡肽(β-EP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

斑點叉尾鮰病毒探針法熒光定量PCR試劑盒圖片熱休克蛋白 27(HSP27)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  Panaxydiol  中文名：  分子式：C17H24O2 

曲拉通X-100   100ml  3-Amino-4-hydroxybenzoic acid  中文名：3-氨基-4-羥基苯甲酸  分子式：C7H7NO3  度：98.0%

羥自由基檢測   Hydroxyl radical detection  Rasagiline mesylate  中文名：甲磺酸雷沙吉蘭  分子式：3S 

羥脯酸測試前處理試劑   Preeatme reage hydroxyproline test  Rengynic acid  中文名：  分子式：C8H14O4 

羥脯酸（Hyp）測試盒   Glamine syhetase (GS) test kit                 Rengynic acid  517883-38-4  中文名：  分子式：C8H14O4

服務流程：

斑點叉尾鮰病毒探針法熒光定量PCR試劑盒圖片1、根據客戶提供的基因序列設計特異性引物和熒光探針（染料法只需設計引物）

2、抽提DNA、RNA，并對RNA進行逆轉錄

3、實時熒光定量PCR

4、提供完整的實驗結果報告(檢測數據、溶解曲線、擴增曲線)

5、返還樣品（引物、RNA和cDNA）