PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對(duì)DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實(shí)現(xiàn)基因的相對(duì)定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

酯化梭狀芽孢桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒圖片簡介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f2-Flurbiprofen  中文名：氟比洛芬  分子式：C15H13FO2    血0濃度測試盒   可見分光光度法   50管/48樣

2-Fluoroadenosine  中文名：  分子式：C10H12FN5O4    血濃度測試盒   可見分光光度法   50管/48樣

2-Deoxy-2,2-difluoro-D-erythro-pentafuranous-1-ulose-3,5-dibenzoate  中文名：  分子式：C19H14F2O6    血清總鐵結(jié)合能力測試盒   可見分光光度法   50管/48樣           

2-Cyclopropyl-4-(4-fluorophenyl)-quinolyl-3-methanol  中文名：  分子式：C19H16FNO    血漿游離基因組DNA提取試劑盒   Plasma free genomic DNA Exaction Kit

2-Cyclopropyl-4-(4-fluorophenyl)quinoline-3-carboxaldehyde  中文名：  分子式：C19H14FNO    M13噬菌體單鏈基因組DNA快速提取試劑盒   Rapid exaction kit for M13 phage single chain genomic DNA

小鼠乙酰輔酶A羧化酶   英文名稱：   Mouse Acetyl Coenzyme A Carboxylase   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ACC  Dexamethasone 21-phosphate disodium salt  2392-39-4  中文名：地塞米松磷酸鈉  分子式：C22H30FO8P  度：98.0%   

小鼠乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶（CHAT）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           N4-Benzoylcytidine  13089-48-0  中文名：N4-苯甲酰胞苷  分子式：C16H17N3O6 

小鼠乙酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  N1-Methyl-4-nitrobenzene-1,2-diamine  中文名：  分子式：C7H9N3O2  度：98.0%

小鼠乙酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Clopidogrel bisulfate  中文名：硫酸氫氯吡格雷  分子式：C16H18ClNO6S2  度：98.0%

小鼠乙酰膽堿elisa試劑盒   小鼠乙酰膽堿試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠乙酰膽堿試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠乙酰膽堿試劑盒、小鼠乙酰膽堿elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Cynatratoside A  97399-96-7  中文名：白薇苷A  分子式：C28H40O8

Androst-5-en-3-ol-7,17-dione acetate  1449-61-2  中文名：7-酮基去氫表雄酮醋酸酯  分子式：C21H28O4    人樁蛋白elisa試劑盒   人樁蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人樁蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人樁蛋白試劑盒、人樁蛋白elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

7-Keto-dehydroepiandrosterone  566-19-8  中文名：7-酮基去氫表雄酮  分子式：C19H26O3    人乙脫氫酶elisa試劑盒   人乙脫氫酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人乙脫氫酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人乙脫氫酶試劑盒、人乙脫氫酶elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Sodium prasterone sulfate  1099-87-2  中文名：去氫表雄酮硫酸鈉鹽  分子式：C19H27NaO5S    人血紅蛋白elisa試劑盒   人血紅蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人血紅蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人血紅蛋白試劑盒、人血紅蛋白elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Dehydroepiandrosterone enanthate  23983-43-9  中文名：普拉雄酮庚酸酯  分子式：C26H40O3    人心肌錨蛋白重復(fù)域1elisa試劑盒   人心肌錨蛋白重復(fù)域1試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人心肌錨蛋白重復(fù)域1試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人心肌錨蛋白重復(fù)域1試劑盒、人心肌錨蛋白重復(fù)域1 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  

Boldenone acetate  2363-59-9  中文名：寶丹酮醋酸酯  分子式：C21H28O3    人轉(zhuǎn)移因子(TF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子 -2(TIMP-2)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國 R&D     Rosuvastain Calcium  147098-20-2  中文名：瑞舒伐他汀鈣  分子式：C22H28FN3O6S 

基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子 -1(TIMP-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國 R&D  Rosuvastain Calcium  147098-20-2  中文名：瑞舒伐他汀鈣  分子式：C22H28FN3O6S  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

酯化梭狀芽孢桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒圖片基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1（TIMP-1）   96T/48T                 Ornidazole  16773-42-5  中文名：奧硝唑  分子式：C7H10ClN3O3 

基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）   96T/48T  Ornidazole  16773-42-5  中文名：奧硝唑  分子式：C7H10ClN3O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

基孔肯雅病毒(CHIKV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T                 Trazodone hydrochloride  25332-39-2  中文名：鹽酸曲唑酮  分子式：C19H23Cl2N5O

注意事項(xiàng)：

1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。