實時熒光定量PCR：

實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：

1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性極好，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。

2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。

外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性最好的定量方法，已得到全世界的公認，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。

參數(shù)規(guī)格：

產品名稱：偽結核棒桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒圖片

英文名稱：Corynebacterium pseudotuberculosis

貨號: GOY-M3876

產品規(guī)格：50T

產品運輸：低溫運輸

產品保存：-20℃保存

產品有效期：一年

產品及特點:

是從土壤農桿菌 CP4 菌株中分離得到的抗除草劑草甘膦基因，是轉基因植物研究中最為常用的一種篩選標記基因，因此本公司根據(jù)探針法 qPCR 原理開發(fā)了專門用于檢測 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 的試劑盒，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2. 根據(jù) 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 保守區(qū)域設計引物和探針，能專一性地檢測出樣品中的

鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分，但不能檢測其他非 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 一管式閉管操作，降低了交叉污染。

5. 快速，整個檢測過程（按一個樣品計）所需時間僅為 2.0 小時。

6. 本只能用于科研，足夠 50 次 20uL 體系的探針法熒光定量 PCR。

操作步驟：

下列圖示以Venor Gem OneStep 支原體 常規(guī)PCR 檢測試劑盒 (一步法)，具體產品操作以說明書為準。

第1步：樣本處理：

第2步：試劑制備：

第3步：PCR體系建立：

第4步：啟動PCR反應

第5步：電泳結果分析

191bp為內控對照條帶，表明PCR反應正常。

當樣本存在支原體污染時，由于內控對照與支原體DNA存在競爭，內控對照條帶變弱（例如支原體DNA＞103拷貝）。

陽性對照中支原體DNA＞104拷貝，內控對照條帶會完全消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶，此條帶不影響檢測結果。

如果待測樣本對PCR產生抑制，則內控對照條帶變弱（和陰性對照相比），此時應先進行DNA抽提（推薦使用：Venor Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒），然后再檢測。

使用方法：

一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。

2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。

三、設置qPCR反應（20 μL體系，在樣品制備室進行）

10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應設置數(shù)量相應增加2或3倍。

11. 產品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）

f1,6-Anhydro-β-D-glucose  中文名：1,6-脫水-β-D-葡萄糖  分子式：C6H10O5    小鼠水通道蛋白5(AQP-5)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

1,6,2',6'-O-Tetraacetyl-3-O-trans-p-coumaroylsucrose  中文名：  分子式：C29H36O17    小鼠水通道蛋白4(AQP-4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

1,6,2',3',6'-O-Pentaacetyl-3-O-trans-p-coumaroylsucrose  中文名：  分子式：C31H38O18    小鼠水通道蛋白3(AQP-3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

1,5-Pentanediol diacrylate  中文名：  分子式：C11H16O4    小鼠組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

1,5,15-Tri-O-methylmorindol  中文名：  分子式：C18H16O6    小鼠組織多肽抗原(TPA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠內皮抑素(mouse Endostatin)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝     Diclofenac sodium  15307-79-6  中文名：雙氯芬酸鈉  分子式：C14H10Cl2NNaO2 

小鼠內皮細胞粘附分子elisa試劑盒   小鼠內皮細胞粘附分子試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠內皮細胞粘附分子試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠內皮細胞粘附分子試劑盒、小鼠內皮細胞粘附分子elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。     N-[3-Chloro-4-(3-fluorobenzyloxy)phenyl]-6-iodoquinazolin-4-amine  231278-20-9  中文名：  分子式：C21H14ClFIN3O 

小鼠內皮細胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Methyl chlorogenate  中文名：綠原酸甲酯  分子式：C17H20O9  度：98.0%

小鼠內皮細胞生長因子受體elisa試劑盒   小鼠內皮細胞生長因子受體試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠內皮細胞生長因子受體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠內皮細胞生長因子受體試劑盒、小鼠內皮細胞生長因子受體elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  Methyl 4-O-feruloylquinate  中文名：  分子式：C18H22O9  度：95.0%

小鼠內皮細胞生長因子受體-3(VEGFR-3/Flt-4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Fexofenadine hydrochloride  中文名：鹽酸非索非那定  分子式：C32H40ClNO4

3-Acetyl-2,5-dichlorothiophene  36157-40-1  中文名：  分子式：C6H4Cl2OS    人脂蛋白α(Lp-α)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

4-Hydroxy-2-(3-methoxypropyl)-3,4-dihydro-2H-thieno[3,2-e][1,2]thiazine-6-sulfonamide 1,1-dioxide  154127-42-1  中文名：  分子式：C10H16N2O6S3    人骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Boc-3-Phenylisoserine  145514-62-1  中文名：  分子式：C14H19NO5    人Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

3-tert-Butoxycarbony-2-(4-anisyl)-4-phenyl-5-oxazolidinecarboxylic acid  196404-55-4  中文名：  分子式：C22H25NO6    人脫氧酚/脫氧啉(DPD)ELISAKit   ELISA.   96T/48T            

N-Benzoyl-(2R,3S)-3-phenylisoserine  132201-33-3  中文名：  分子式：C16H15NO4    人脂蛋白aelisa試劑盒   人脂蛋白a試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人脂蛋白a試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：人脂蛋白a試劑盒、人脂蛋白a elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

偽結核棒桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒圖片大鼠血小板生成素(TPO)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Periplocoside M  116782-73-1  中文名：北五加皮苷M  分子式：C34H52O9 

大鼠纖溶酶原激活物抑制因子elisa試劑盒   大鼠纖溶酶原激活物抑制因子試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   大鼠纖溶酶原激活物抑制因子試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：大鼠纖溶酶原激活物抑制因子試劑盒、大鼠纖溶酶原激活物抑制因子eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  Sulfamonomethoxine  中文名：磺胺間甲氧嘧啶  分子式：C11H12N4O3S 

大鼠纖溶酶原激活物抑制因子1elisa試劑盒   大鼠纖溶酶原激活物抑制因子1試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   大鼠纖溶酶原激活物抑制因子1試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：大鼠纖溶酶原激活物抑制因子1試劑盒、大鼠纖溶酶原激活物抑制因子1eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  Sulfamonomethoxine  1220-83-3  中文名：磺胺間甲氧嘧啶  分子式：C11H12N4O3S  度：98.0%   

大鼠纖溶酶原激活物抑制物elisa試劑盒   大鼠纖溶酶原激活物抑制物試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   大鼠纖溶酶原激活物抑制物試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：大鼠纖溶酶原激活物抑制物試劑盒、大鼠纖溶酶原激活物抑制物eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。     Sulfamonomethoxine  1220-83-3  中文名：磺胺間甲氧嘧啶  分子式：C11H12N4O3S 

大鼠維生素C(VC)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Tolvaptan  150683-30-0  中文名：托伐普坦  分子式：C26H25ClN2O3  度：98.0%  關鍵詞：

服務流程：

偽結核棒桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒圖片1、根據(jù)客戶提供的基因序列設計特異性引物和熒光探針（染料法只需設計引物）

2、抽提DNA、RNA，并對RNA進行逆轉錄

3、實時熒光定量PCR

4、提供完整的實驗結果報告(檢測數(shù)據(jù)、溶解曲線、擴增曲線)

5、返還樣品（引物、RNA和cDNA）