PCR實驗方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應(yīng)進行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡介：實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結(jié)果分析。

（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標(biāo)準：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標(biāo)準。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

fα-Spinasterol  481-18-5  中文名：α-菠甾醇  分子式：C29H48O  度：97.0%  關(guān)鍵詞：  抗真菌; 栝樓; 豆甾烷; 中藥對照品; 中藥標(biāo)準品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠抗線粒體抗體(mouse AMA)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

α-Lipoic acid  1077-28-7  中文名：α-硫辛酸  分子式：C8H14O2S2  度：98.5%  關(guān)鍵詞：  植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠抗核抗體(mouse ANA)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

α-Lapachone  4707-33-9  中文名：  分子式：C15H14O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  萘醌; 中藥對照品; 中藥標(biāo)準品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠緊張素II(mouse ANG II)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  

α-D-Glucose  492-62-6  中文名：α-D-葡萄糖  分子式：C6H12O6  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠脂肪酸合成酶   英文名稱：   Mouse Fatty Acid Syhase   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   FAS

Zopiclone  43200-80-2  中文名：佐匹克隆  分子式：C17H17ClN6O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠促卵泡生成激素   英文名稱：   Mouse Follicle Stimulating Hormone   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   FSH

小鼠性激素結(jié)合球蛋白(mouse SHBG)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  Methenolone acetate  中文名：美替諾龍醋酸酯  分子式：C22H32O3  度：98.0%

小鼠信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7(Smad7)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Methoxydienone  2322-77-2  中文名：沃氏物  分子式：C20H28O2 

小鼠新生甲狀腺素elisa試劑盒   小鼠新生甲狀腺素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠新生甲狀腺素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠新生甲狀腺素試劑盒、小鼠新生甲狀腺素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  Methasterone  中文名：甲基屈他雄酮  分子式：C21H34O2  度：98.0%

小鼠新生甲狀腺素(NN-T4)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Metamizole sodium  中文名：安乃近  分子式：C13H16N3NaO4S  度：98.0%

小鼠心肽elisa試劑盒   小鼠心肽試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠心肽試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠心肽試劑盒、小鼠心肽eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。     Betamethasone  中文名：倍他米松  分子式：C22H29FO5

Lynestrenol  52-76-6  中文名：利奈孕醇  分子式：C20H28O    豚鼠白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA試劑盒 ，英文名： IL1Ra ELISA Kit

Norethindrone  68-22-4  中文名：炔諾酮  分子式：C20H26O2    Human ubiquitin activating enzyme (E1/UBAE) ELISA Kit 人泛素激活酶(E1/UBAE)ELISA試劑盒

Allylestrenol  432-60-0  中文名：烯丙雌醇  分子式：C21H32O    rabbitIerleukin4,IL-4ELISAKit 兔子白介素4(IL-4)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

Estradiol-3-benzoate-17-butyrate  63042-18-2  中文名：雌二醇-3-苯甲酸-17-丁酸酯  分子式：C29H34O4    CLIAKitforBeta-CG(MouseChorionicGonadoophinBeta)ELISAKit小鼠絨毛膜促性腺激素β規(guī)格：48T/96T

Estradiol hexahydrobenzoate  15140-27-9  中文名：環(huán)己甲酸雌二醇  分子式：C25H34O3    細菌乙醇比色法定量檢測試劑盒20次

小隱孢子蟲探針法熒光定量PCR試劑盒圖片超氧化物歧化酶（SOD）分型測試盒（羥胺法）  Polyhydroxybutyrate  中文名：聚羥基丁酸酯  分子式：C12H20O7 

超氧化物歧化酶   30KU  Amoxicillin  中文名：阿莫西林  分子式：C16H19N3O5S  度：98.0%

超微量Na+K+–ATP酶測定試劑盒  Precursor of cefcapene diisopropylanmine salt  153012-37-4  中文名：  分子式：C28H42N6O8S2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

超微量Na+K+–ATP酶測定試劑盒                    Pitavastatin calcium  147526-32-7  中文名：匹伐他汀鈣  分子式：C50H46CaF2N2O8 

超微量Ca-ATP酶測定試劑盒  Aurantio-obtusin  中文名：橙黃決明素  分子式：C17H14O7  度：99.0%

注意事項：

小隱孢子蟲探針法熒光定量PCR試劑盒圖片1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；

8．PCR擴增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點擊了解更公司產(chǎn)品。