實(shí)時(shí)熒光定量PCR：

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的局限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計(jì)算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：

1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí)，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對數(shù)期），此時(shí)微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性極好，即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增，得到的Ct值是恒定的。

2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定，因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。

外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確，重現(xiàn)性最好的定量方法，已得到全世界的公認(rèn)，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。

參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：木賊鐮刀菌探針法熒光定量PCR試劑盒圖片

英文名稱：Fusarium equiseti

貨號: GOY-M4024

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品及特點(diǎn):

是從土壤農(nóng)桿菌 CP4 菌株中分離得到的抗除草劑草甘膦基因，是轉(zhuǎn)基因植物研究中最為常用的一種篩選標(biāo)記基因，因此本公司根據(jù)探針法 qPCR 原理開發(fā)了專門用于檢測 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2. 根據(jù) 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物和探針，能專一性地檢測出樣品中的

鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分，但不能檢測其他非 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 一管式閉管操作，降低了交叉污染。

5. 快速，整個檢測過程（按一個樣品計(jì)）所需時(shí)間僅為 2.0 小時(shí)。

6. 本只能用于科研，足夠 50 次 20uL 體系的探針法熒光定量 PCR。

操作步驟：

下列圖示以Venor Gem OneStep 支原體 常規(guī)PCR 檢測試劑盒 (一步法)，具體產(chǎn)品操作以說明書為準(zhǔn)。

第1步：樣本處理：

第2步：試劑制備：

第3步：PCR體系建立：

第4步：啟動PCR反應(yīng)

第5步：電泳結(jié)果分析

191bp為內(nèi)控對照條帶，表明PCR反應(yīng)正常。

當(dāng)樣本存在支原體污染時(shí)，由于內(nèi)控對照與支原體DNA存在競爭，內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ɡ缰гwDNA＞103拷貝）。

陽性對照中支原體DNA＞104拷貝，內(nèi)控對照條帶會完全消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶，此條帶不影響檢測結(jié)果。

如果待測樣本對PCR產(chǎn)生抑制，則內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ê完幮詫φ障啾龋?，此時(shí)應(yīng)先進(jìn)行DNA抽提（推薦使用：Venor Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒），然后再檢測。

使用方法：

一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。

2. 標(biāo)記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個樣品，必須設(shè)置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。

三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）

10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。

11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）

fClotrimazole  23593-75-1  中文名：克霉唑  分子式：C22H17ClN2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠葡萄糖激酶(GCK)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Clorofene  120-32-1  中文名：4-氯-2-芐基苯酚  分子式：C13H11ClO  度：98.0%      小鼠破骨細(xì)胞分化因子(ODF)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Clopidogrel bisulfate  135046-48-9  中文名：硫酸氫氯吡格雷  分子式：C16H18ClNO6S2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠皮質(zhì)/上腺(CO)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Clevidipine butyrate  167221-71-8  中文名：丁酸氯維地平  分子式：C21H23Cl2NO6  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠破骨細(xì)胞分化因子(ODF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Clerosterol glucoside  123621-00-1  中文名：赤桐甾醇葡萄糖苷  分子式：C35H58O6  度：93.0%  關(guān)鍵詞：  豆甾烷; 甾苷; 中藥對照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠Toll樣受體9(TLR-9/CD289)ELISAkit   ELISA.   96T/48T

小鼠膠原酶IIelisa試劑盒   小鼠膠原酶II試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠膠原酶II試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠膠原酶II試劑盒、小鼠膠原酶IIeisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  Desglucohellebrin  20300-44-1  中文名：  分子式：C30H42O10  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  強(qiáng)心; 強(qiáng)心苷; 甾苷; 中藥對照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

小鼠膠原酶II(CollagenaseII)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Drevogenin A  10163-83-4  中文名：  分子式：C28H42O7 

小鼠膠原酶II(CollagenaseII)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Falcarinol  21852-80-2  中文名：  分子式：C17H24O  度：%  關(guān)鍵詞： 

小鼠膠原酶Ielisa試劑盒   小鼠膠原酶I試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠膠原酶I試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠膠原酶I試劑盒、小鼠膠原酶Ieisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  Desglucohellebrin  中文名：  分子式：C30H42O10 

小鼠膠原酶I(CollagenaseI)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Falcarinol  21852-80-2  中文名：  分子式：C17H24O組織PKA激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次  (S)-4-Methoxydalbergione  2543-95-5  中文名：(S)-4-甲氧基黃檀醌  分子式：C16H14O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

組織PIM2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次  (S,E)-Deca-2,9-diene-4,6-diyne-1,8-diol  中文名：  分子式：C10H10O2  度：%

組織PIM1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次  (Z)-Butylidenephthalide  72917-31-8  中文名：  分子式：C12H12O2  度：%  關(guān)鍵詞： 

組織PI3K激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次  (Z)-Lachnophyllum lactone  中文名：  分子式：C10H10O2  度：%

組織PHKG2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次  1-(2-Chloroacetyl)pyrrolidine-2-carbonitrile  207557-30-5  中文名：  分子式：C7H9ClN2O  度：98.0%  關(guān)鍵詞：

木賊鐮刀菌探針法熒光定量PCR試劑盒圖片Salvisyrianone  250691-57-7  中文名：  分子式：C20H24O3  度：95.0%  關(guān)鍵詞：  降壓; 臺灣杉; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠血小板反應(yīng)蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

S-2-Benzothiazolyl2-amino-alpha-(methoxyimino)-4-thiazolethiolacetate  80756-85-0  中文名：AE活性酯  分子式：C13H10N4O2S3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠骨粘連蛋白(ON)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Rubioncolin C  132242-52-5  中文名：  分子式：C27H22O6  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠葉酸(FA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Rubianthraquinone  644967-44-2  中文名：  分子式：C16H12O5  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  海巴戟; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠組蛋白H2b(histon-H2b)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

Rubiadin  117-02-2  中文名：甲基異茜草素  分子式：C15H10O4  度：99.0%  關(guān)鍵詞：  木巴戟屬; 茜草屬; 中藥對照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

服務(wù)流程：

木賊鐮刀菌探針法熒光定量PCR試劑盒圖片1、根據(jù)客戶提供的基因序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針（染料法只需設(shè)計(jì)引物）

2、抽提DNA、RNA，并對RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄

3、實(shí)時(shí)熒光定量PCR

4、提供完整的實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)告(檢測數(shù)據(jù)、溶解曲線、擴(kuò)增曲線)

5、返還樣品（引物、RNA和cDNA）