PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對(duì)DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測(cè), 實(shí)現(xiàn)基因的相對(duì)定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡(jiǎn)介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國(guó)Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L(zhǎng)基因序列。

（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f1-(2-Amino-5-chlorophenyl)-1-(trifluoromethyl)-3-cyclopropyl-2-propyn-1-ol  中文名：  分子式：C13H11ClF3NO  度：98.0%  小鼠膽囊收縮素elisa試劑盒   小鼠膽囊收縮素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠膽囊收縮素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠膽囊收縮素試劑盒、小鼠膽囊收縮素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Duloxetine hydrochloride  中文名：鹽酸度洛西汀  分子式：C18H20ClNOS  度：98.0%  小鼠二肽基肽酶elisa試劑盒   小鼠二肽基肽酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠二肽基肽酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠二肽基肽酶試劑盒、小鼠二肽基肽酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  

Ritonavir  中文名：利托那韋  分子式：C37H48N6O5S2  度：98.0%  小鼠單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

3-O-Acetylandrostenone hydrazone  中文名：3-O-乙?；弁?/span>  分子式：C21H32N2O2  度：98.0%  小鼠單胺氧化酶A（MAOA）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Androstenone hydrazone  中文名：雄酮腙  分子式：C19H30N2O  度：98.0%  小鼠大內(nèi)皮素(BigET)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠N端前腦素(-proBNP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Glaucogenin C mono-D-thevetoside  中文名：  分子式：C28H40O9 

小鼠N端前腦素(mouse -proBNP)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Dehydrotolvaptan  137973-76-3  中文名：  分子式：C26H23ClN2O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

小鼠N端前腦素   英文名稱：   N-terminal pro-brain naiuretic peptide   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   -proBNP  Finasteride  中文名：非那雄胺  分子式：C23H36N2O2 

小鼠NOD樣受體-2(NOD-2)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Benzyl carbazate  中文名：肼基甲酸芐酯  分子式：C8H10N2O2 

小鼠M-膽堿能受體結(jié)合力   英文名稱：   M—cholinoceptor binding capacity   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   MCBC  Lapachol  84-79-7  中文名：拉帕醇  分子式：魚雌激素elisa試劑盒   魚雌激素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   魚雌激素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：魚雌激素試劑盒、魚雌激素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  α-Spinasterol  中文名：α-菠甾醇  分子式：C29H48O 

魚雌二醇elisa試劑盒   魚雌二醇試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   魚雌二醇試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：魚雌二醇試劑盒、魚雌二醇eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  α-Spinasterol  481-18-5  中文名：α-菠甾醇  分子式：C29H48O  度：97.0%  關(guān)鍵詞：  抗真菌; 栝樓; 豆甾烷; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)

魚補(bǔ)體蛋白4(C4)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  α-Spinasterol acetate  中文名：α-菠甾醇乙酸酯  分子式：C31H50O2  度：96.0%

魚補(bǔ)體3（C3）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  α-Spinasterol acetate  中文名：α-菠甾醇乙酸酯  分子式：C31H50O2 

魚0酸化腺苷酸活化蛋白激酶   ELISA.   96T/48T  α-Lipoic acid  1077-28-7  中文名：α-硫辛酸  分子式：C8H14O2S2  度：98.5%  關(guān)鍵詞：  植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)

利什曼原蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒運(yùn)輸N-Benzoyl-L-tyrosine ethyl ester  3483-82-7  中文名：N-苯甲?；?/span>-L-酪氨酸乙酯  分子式：C18H19NO4    FuchsinAcid   25g

O-Benzyl-L-serine  4726-96-9  中文名：O-芐基-L-絲氨酸  分子式：C10H13NO3    G-418抗菌素   1g

S-Benzyl-L-cysteine  3054/1/1  中文名：S-芐基-L-半胱氨酸  分子式：C10H13NO2S    G-418Sulfate   5g              

Benzoyl-DL-valine  2901-80-6  中文名：苯甲酰-DL-纈氨酸  分子式：C12H15NO3    酸性成纖維生長(zhǎng)因子   英文名稱：   acid fibroblast growth factor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   a-FGF

O-Benzyl-L-tyrosine  16652-64-5  中文名：O-芐基-L-酪氨酸  分子式：C16H17NO3    堿性成纖維生長(zhǎng)因子   英文名稱：   basic fibroblast growth factor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   b-FGF

注意事項(xiàng)：

利什曼原蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒運(yùn)輸1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。