PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度的變化來(lái)對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針?lè)āＭㄟ^(guò)對(duì)DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測(cè), 實(shí)現(xiàn)基因的相對(duì)定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡(jiǎn)介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國(guó)Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問(wèn)題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L(zhǎng)基因序列。

（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來(lái)源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

fS-2-Benzothiazolyl2-amino-alpha-(methoxyimino)-4-thiazolethiolacetate  中文名：AE活性酯  分子式：C13H10N4O2S3  度：98.0%  小鼠白介素 -13(p70) (mouse IL-13)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國(guó) Biosource  

Azathioprine  中文名：硫唑嘌呤  分子式：C9H7N7O2S  度：98.0%  小鼠癌胚抗原elisa試劑盒   小鼠癌胚抗原試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠癌胚抗原試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠癌胚抗原試劑盒、小鼠癌胚抗原elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

2-Benzothiazolol  中文名：2-羥基苯并噻唑  分子式：C7H5NOS  度：98.0%  超氧化物歧化酶測(cè)elisa試劑盒   超氧化物歧化酶測(cè)試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   超氧化物歧化酶測(cè)試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：超氧化物歧化酶測(cè)試劑盒、超氧化物歧化酶測(cè)elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

1,2-Benzanthraquinone  中文名：1,2-苯并奎寧酮  分子式：C18H10O2  度：98.0%  鹿紅細(xì)胞膜蛋白elisa試劑盒   鹿紅細(xì)胞膜蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   鹿紅細(xì)胞膜蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：鹿紅細(xì)胞膜蛋白試劑盒、鹿紅細(xì)胞膜蛋白試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

9-Anthracenecarboxylic acid  中文名：9-蒽甲酸  分子式：C15H10O2  度：98.0%  小鼠16α羥基雌elisa試劑盒   小鼠16α羥基雌試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠16α羥基雌試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠16α羥基雌試劑盒、小鼠16α羥基雌elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

細(xì)菌/總RNA提取試劑盒   Bacterial / total RNA Exaction Kit  Riligustilide  中文名：  分子式：C24H28O4 

細(xì)胞外基質(zhì)蛋白   英文名稱：   Human Asporin1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   ASPN1  Xanthinol nicotinate  437-74-1  中文名：煙酸占替諾  分子式：C19H26N6O6 

細(xì)胞松弛素B   `1mg  Aripiprazole  129722-12-9  中文名：阿立哌唑  分子式：C23H27Cl2N3O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

細(xì)胞色素C   英文名稱：   Cytochrome C   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   Cytochrome C  Nifedipine  21829-25-4  中文名：硝苯地平  分子式：C17H18N2O6  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

細(xì)胞色素C   50mg  Arillatose B  中文名：  分子式：C22H30O14  度：96.5%心脂肪酸結(jié)合蛋白 (H-FABP)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Norfloxacin  中文名：諾氟沙星  分子式：C16H18FN3O3  度：98.0%

心脂肪酸結(jié)合蛋白   英文名稱：   hea fatty acid-binding protein   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   H-FABP  Norethindrone  中文名：炔諾酮  分子式：C20H26O2  度：98.0%

心活性多肽13   英文名稱：   Apelin 13   英文縮寫(xiě)：   AP13   規(guī)格：   48T/96T  Norandrostenedione  中文名：19-去甲-4-雄烯二酮  分子式：C18H24O2  度：98.0%

心活性多肽   英文名稱：   Apelin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   AP  n-Octylbenzene  中文名：  分子式：C14H22  度：98.0%

心肌轉(zhuǎn)錄因子GATA4   英文名稱：   cardiac muscle anscription factor GATA4   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   GATA4  Androstenediol  中文名：雄烯二醇  分子式：C19H30O2  度：98.0%

改良安卡拉痘苗病毒探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒廠家Methyl 4'-bromomethyl biphenyl-2-carboxylate  中文名：  分子式：C15H13BrO2  度：98.0%  小鼠C反應(yīng)蛋白   英文名稱：   C-reactive protein   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   CRP

Methyl 4'-methylbiphenyl-2-carboxylate  中文名：  分子式：C15H14O2  度：98.0%  小鼠CXC趨化因子受體3   英文名稱：   CXC chemokine receptor 3   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   CXCR3

4-Methyl-2-propyl-1H-benzimidazole-6-carboxylic acid  中文名：  分子式：C12H14N2O2  度：98.0%  小鼠CXC趨化因子配體16   英文名稱：   CXC chemokine ligand 16   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   CXCL16

Androstenediol  中文名：雄烯二醇  分子式：C19H30O2  度：98.0%  小鼠CXCL1/KC   英文名稱：   CXC chemokine ligand 1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   CXCL1/KC

Testosterone benzoate  中文名：17-安息香酸雄烯醇酮  分子式：C26H32O3  度：98.0%  小鼠CXC趨化因子受體3(CXCR3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事項(xiàng)：

改良安卡拉痘苗病毒探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒廠家1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。