PCR實驗方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應進行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務：

簡介：實時熒光定量PCR技術于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結(jié)果分析。

（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標準：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f5-(1-Piperazinyl)benzofuran-2-carboxamide  中文名：  分子式：C13H15N3O2  度：98.0%  小鼠Ⅲ型前膠原肽elisa試劑盒   小鼠Ⅲ型前膠原肽試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠Ⅲ型前膠原肽試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠Ⅲ型前膠原肽試劑盒、小鼠Ⅲ型前膠原肽eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

Vilazodone hydrochloride  中文名：鹽酸維拉唑酮  分子式：C26H28ClN5O2  度：98.0%  小鼠Ⅱ型膠原elisa試劑盒   小鼠Ⅱ型膠原試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠Ⅱ型膠原試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠Ⅱ型膠原試劑盒、小鼠Ⅱ型膠原eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  

2-Cyano-N-[4-(Trifluoromethyl)Phenyl]Acetamide  中文名：  分子式：C10H7F3N2O  度：98.0%  小鼠BH3結(jié)構域凋亡誘導蛋白(Bid)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Teriflunomide  中文名：特立氟胺  分子式：C12H9F3N2O2  度：98.0%  小鼠apelin12(AP12)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

3-(3-Chloropropyl)-1,3-dihydro-7,8-dimethoxy-2H-3-benzazepin-2-one  中文名：  分子式：C15H18ClNO3  度：98.0%  小鼠8異前列腺素(8-iso-PG)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔子組織多肽抗原(TPA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝  2,2'-Bicinchoninic acid  1245-13-2  中文名：2,2'-二辛可寧酸  分子式：C20H12N2O4  度：98.0%   

兔子組胺(HIS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Albendazole  54965-21-8  中文名：阿苯達唑  分子式：C12H15N3O2S 

兔子組胺(HIS)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝  2-(Phenylmethoxy)-naphthalene  中文名：2-萘酚芐基醚  分子式：C17H14O  度：98.0%

兔子轉(zhuǎn)化生長因子β1elisa試劑盒   兔子轉(zhuǎn)化生長因子β1試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子轉(zhuǎn)化生長因子β1試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔子轉(zhuǎn)化生長因子β1試劑盒、兔子轉(zhuǎn)化生長因子β1eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  Agomelatine  138112-76-2  中文名：阿戈美拉汀  分子式：C15H17NO2  度：98.0%  關鍵詞： 

兔子轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Afatinib  850140-72-6  中文名：阿法替尼  分子式：C24H25ClFN5O3  度：98.0%小鼠胰蛋白酶elisa試劑盒   小鼠胰蛋白酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠胰蛋白酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠胰蛋白酶試劑盒、小鼠胰蛋白酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  Loroglossin  58139-22-3  中文名：  分子式：C34H46O18  度：97.0%  關鍵詞：  抗癡呆; 梧桐屬; 繡線菊屬; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

小鼠胰蛋白酶(ypsin)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  N-(Quinoxalin-2-yl)-4-(quinoxalin-2-ylamino)benzenesulfonamide  NO  中文名：  分子式：C22H16N6O2S  度：98.0%  關鍵詞： 

小鼠胰蛋白酶(ypsin)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Ethyl (1-hydroxy-4-oxocyclohexa-2,5-dien-1-yl)acetate  60263-06-1  中文名：  分子式：C10H12O4 

小鼠葉酸elisa試劑盒   小鼠葉酸試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠葉酸試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠葉酸試劑盒、小鼠葉酸elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  N,N-Bis(2-chloroethyl)-p-toluenesulphonamide  中文名：N,N-雙(2-氯乙基)對甲苯磺酰胺  分子式：C11H15Cl2NO2S 

小鼠葉酸(FA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Mitiglinide calcium  145525-41-3  中文名：米格列奈鈣  分子式：C19H25NO3  度：98.0%  關鍵詞：

無乳支原體探針法熒光定量PCR試劑盒運輸Lincomycin  中文名：林可霉素  分子式：C18H34N2O6S    豬催乳素（PRL）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Linagliptin  中文名：利拉利汀  分子式：C25H28N8O2    豬促胃液素受體(GsaR)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Lidocaine hydrochloride  中文名：鹽酸利多卡因  分子式：C14H23ClN2O    豬促生長激素釋放激素(GHRH)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Lidocaine  中文名：利多卡因  分子式：C14H22N2O    豬促卵泡素(FSH)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Levodopa  中文名：左旋多巴  分子式：C9H11NO4    豬低分子肝素(LMWH)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項：

無乳支原體探針法熒光定量PCR試劑盒運輸1．基礎程序；

2．擴增溫度和延伸溫度；

3．反應時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應液的配制；

6．PCR技術的基本原理；

7．PCR的反應動力學；

8．PCR擴增產(chǎn)物；

9．PCR反應體系與反應條件。點擊了解更公司產(chǎn)品。