PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實(shí)現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f豚鼠端粒酶(TE)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Aminophenazone  中文名：氨基比林  分子式：C13H17N3O  度：98.0%

豚鼠端粒酶(TE)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Ambroxol hydrochloride  中文名：鹽酸氨溴索  分子式：C13H19Br2ClN2O  度：98.0%

豚鼠單核細(xì)胞趨化蛋白4elisa試劑盒   豚鼠單核細(xì)胞趨化蛋白4試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豚鼠單核細(xì)胞趨化蛋白4試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豚鼠單核細(xì)胞趨化蛋白4試劑盒、豚鼠單核細(xì)胞趨化蛋白4eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Ambroxol hydrochloride  23828-92-4  中文名：鹽酸氨溴索  分子式：C13H19Br2ClN2O 

豚鼠單核細(xì)胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Aminophenazone  中文名：氨基比林  分子式：C13H17N3O 

豚鼠單核細(xì)胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Allylestrenol  432-60-0  中文名：烯丙雌醇  分子式：C21H32O

Stanozolol  中文名：康力龍  分子式：C21H32N2O  度：98.0%  小鼠N端前腦素(-proBNP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Oxymetholone  中文名：康復(fù)龍  分子式：C21H32O3  度：98.0%  小鼠NOD樣受體-2(NOD-2)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Mebendazole  中文名：甲苯咪唑  分子式：C16H13N3O3  度：98.0%  小鼠L選擇素(L-Selectin/CD62L)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

8-Hydroxy-7-iodo-5-quinolinesulfonic acid  中文名：喹方  分子式：C9H6INO4S  度：98.0%  小鼠L苯解酶(PAL)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Ornidazole  中文名：奧硝唑  分子式：C7H10ClN3O3  度：98.0%  小鼠KN-62ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝小鼠細(xì)胞凋亡因子配體 (mouse Fas-Ligand)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國 R&D  Malic acid 4-Me ester  中文名：  分子式：C5H8O5 

小鼠細(xì)胞凋亡因子 (mouse Fas)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國 R&D  Malic acid 4-Me ester  中文名：  分子式：C5H8O5  度：%

小鼠細(xì)胞凋亡相關(guān)基因BCL-2   英文名稱：   Cell appoptosis inhibitory BCL-2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   BCL-2  Dehydroepiandrosterone  53-43-0  中文名：脫氫表雄酮  分子式：C19H28O2 

小鼠細(xì)胞蛋白elisa試劑盒   小鼠細(xì)胞蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠細(xì)胞蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠細(xì)胞蛋白試劑盒、小鼠細(xì)胞蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Ethyl2-((tert-butoxycarbonyl)amino)-3-nitrobenzoate  136285-65-9  中文名：  分子式：C14H18N2O6  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

小鼠細(xì)胞蛋白(CC16)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Makisterone A 20,22-monoacetonide  中文名：  分子式：C31H50O7  度：%

魏氏無綠藻探針法熒光定量PCR試劑盒廠家HumanphosphoProteinKinaseC,P-PKCELISAKit人0酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1,6,2',6'-O-Tetraacetyl-3-O-trans-p-coumaroylsucrose  138195-49-0  中文名：  分子式：C29H36O17 

humanphospholipidscramblase1,PLSCR1ELISAKit人0脂爬行酶1(PLSCR1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  17-Acetyloxy-6-chloro-1α-chloromethylpregna-4,6-diene-3,20-dione  中文名：醋酸環(huán)丙氯地孕酮  分子式：C24H30Cl2O4 

HumanPhospholipidaseA2，PL-A2ELISAKit人0脂酶A2(PL-A2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  17-Hydroxy-1a,2a-methylenepregna-4,6-diene-3,20-dione acetate  2701-50-0  中文名：  分子式：C24H30O4 

HumanPhospholipaseCγ1,PLCγ1ELISAKit人0酯酶Cγ鏈(PLCγ1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  16-Acetoxy-7-O-acetylhorminone  269742-39-4  中文名：  分子式：C24H32O7 

HumanPhospholipaseC，PLCELISAKit人0酯酶C(PLC)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  14β,16β-Dihydroxy-3β-(β-D-glucopyranosyloxy)-5α-bufa-20,22-dienolide  中文名：  分子式：C30H44O10

注意事項(xiàng)：

魏氏無綠藻探針法熒光定量PCR試劑盒廠家1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。