概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度的變化來(lái)對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針?lè)āＭㄟ^(guò)對(duì)DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測(cè), 實(shí)現(xiàn)基因的相對(duì)定量、定量和定性分析。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線(xiàn)放線(xiàn)桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

注意事項(xiàng)：

科恩酒曲菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒說(shuō)明書(shū)1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡(jiǎn)介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國(guó)Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問(wèn)題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L(zhǎng)基因序列。

（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來(lái)源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶(hù)的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷(xiāo)產(chǎn)品產(chǎn)品：

f兔子細(xì)胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Acetophenone tosylhydrazone  4545-21-5  中文名：苯乙酮對(duì)甲苯磺?；?/span>  分子式：C15H16N2O2S 

兔子細(xì)胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝  1-Benzyl-5-ethoxyhydantoin  中文名：1-芐基-5-乙氧基海因  分子式：C12H14N2O3  度：98.0%

兔子細(xì)胞間粘附分子2elisa試劑盒   兔子細(xì)胞間粘附分子2試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔子細(xì)胞間粘附分子2試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子細(xì)胞間粘附分子2試劑盒、兔子細(xì)胞間粘附分子2eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Abscisic acid  14375-45-2  中文名：脫落酸  分子式：C15H20O4  度：99.0%  關(guān)鍵詞： 

兔子細(xì)胞間粘附分子2(ICAM-2/CD102)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Abscisic acid  中文名：脫落酸  分子式：C15H20O4  度：99.0%

兔子細(xì)胞間粘附分子2(ICAM-2/CD102)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  9,9-Bis[4-(2-hydroxyethoxy)phenyl]fluorene  117344-32-8  中文名：9,9-雙[4-(2-羥乙氧基)苯基]芴  分子式：C29H26O4

5-Formyl-2-furylboronic acid  中文名：  分子式：C5H5BO4  度：98.0%  激酶（PK）測(cè)試盒   可見(jiàn)分光光度法   50管/48樣           

1-Methyl-aminomethyl naphthalene  中文名：  分子式：C12H13N  度：98.0%  線(xiàn)粒體呼吸鏈復(fù)合物II試劑盒（琥珀酸-輔酶Q還原酶）

Terbinafine  中文名：特比萘芬  分子式：C21H25N  度：98.0%  蛋白質(zhì)羰基含量測(cè)定試劑盒（測(cè)血清、組織）（紫外比色法）

N-[3-Chloro-4-(3-fluorobenzyloxy)phenyl]-6-iodoquinazolin-4-amine  中文名：  分子式：C21H14ClFIN3O  度：98.0%  超微量Ca-ATP酶測(cè)定試劑盒

3-Chloro-4-(3-fluorobenzyloxy)nitrobenzene  中文名：  分子式：C13H9ClFNO3  度：98.0%  超微量Ca2+Mg2+-ATP酶測(cè)定試劑盒（比色法）小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin1(Eotaxin1/CCL11)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Ivabradine hydrochloride  148849-67-6  中文名：鹽酸伊伐布雷定  分子式：C27H37ClN2O5 

小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin1(Eotaxin1/CCL11)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Ethyl 3,5-di-O-caffeoylquinate  143051-74-5  中文名：3,5-二咖啡?？鼘幩嵋阴?/span>  分子式：C27H28O12  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白elisa試劑盒   小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白試劑盒、小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。     Methyl 4-O-feruloylquinate  195723-10-5  中文名：  分子式：C18H22O9 

小鼠嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A(CyPA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Isosorbide dinitrate  中文名：硝酸異山梨酯  分子式：C6H8N2O8  度：98.0%

小鼠視黃醇結(jié)合蛋白4(RBP-4)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Isoniazid  中文名：異  分子式：C6H7N3O  度：98.0%

科恩酒曲菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒說(shuō)明書(shū)HumancytokininMB,CKMBELISA試劑盒人激動(dòng)異構(gòu)酶/細(xì)胞分裂素MB(CKMB)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1-Testosterone  中文名：1-睪酮  分子式：C19H28O2 

HumancytokeratinHighMolecularWeight,CK-HMWELISA試劑盒人高分子量細(xì)胞角蛋白(CK-HMW)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  2-(2-Aminothiazole-4-yl)-2-methoxyiminoacetic acid  65872-41-5  中文名：氨噻肟酸  分子式：C6H7N3O3S 

Humancytokeratinfragmeaigen21-1,CYFRA21-1ELISA試劑盒人細(xì)胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  2-(2'-Hydroxytetracosanoylamino)-octadecane-1,3,4-triol  中文名：  分子式：C42H85NO5 

Humancytokeratin20,CK20ELISA試劑盒人細(xì)胞角蛋白20(CK20)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  2-(4-Chloro-3-hydroxy-1-butynyl)-5-(1,3-pentadiynyl)thiophene  中文名：  分子式：C13H9ClOS 

Humancytokeratin20,CK-20ELISA試劑盒人細(xì)胞角蛋白20(CK-20)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  2-(3-Methoxypropyl)-4-oxo-3,4-dihydro-2H-thieno[3,2-e][1,2]thiazine-6-sulfonamide 1,1-dioxide  154127-41-0  中文名：  分子式：C10H14N2O6S3