PCR實驗方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產物不斷積累，熒光信號也會相應的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應進行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務：

簡介：實時熒光定量PCR技術于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉錄成cDNA。

（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結果分析。

（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標準：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

以下是公司正在熱銷產品產品：

f兔氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  5'-O-Dimethoxytrityl-N-benzoyl-desoxycytidine  中文名：5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯基)-N(4)-苯甲酰基-2'-脫氧胞苷  分子式：C37H35N3O7  度：98.0%

兔氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              5-Androsten-3β-ol-17-one ethyleneketal  中文名：  分子式：C21H32O3 

兔氧化低密度脂蛋白   英文名稱：   Rabbit oxidized Low Density Lipoprotein   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   oxLDL  Pemetrexed  137281-23-3  中文名：培美曲塞二鈉  分子式：C20H21N5O6 

兔血小板衍生生長因子(PDGF)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           5'-O-Dimethoxytrityl-N-benzoyl-desoxycytidine  中文名：5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯基)-N(4)-苯甲?；?/span>-2'-脫氧胞苷  分子式：C37H35N3O7 

兔血小板衍化生長因子(rabbit PDGF)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  5-Fluorouracil  中文名：  分子式：C4H3FN2O2  度：98.0%

N,N-dimethyl-2-Quinoxalinamine  中文名：  分子式：C10H11N3  度：98.0%  兔子瘦素(LEP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

2-Hydroxyquinoxaline  中文名：  分子式：C8H6N2O  度：98.0%  兔子視黃醇結合蛋白4(RBP-4)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Sulfaquinoxaline  中文名：磺胺喹噁啉  分子式：C14H12N4O2S  度：98.0%  兔子髓0脂堿性蛋白elisa試劑盒   兔子髓0脂堿性蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子髓0脂堿性蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：兔子髓0脂堿性蛋白試劑盒、兔子髓0脂堿性蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

Metamizole sodium  中文名：安乃近  分子式：C13H16N3NaO4S  度：98.0%  兔子視黃醇結合蛋白4elisa試劑盒   兔子視黃醇結合蛋白4試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子視黃醇結合蛋白4試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：兔子視黃醇結合蛋白4試劑盒、兔子視黃醇結合蛋白4eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

Valsartan  中文名：纈沙坦  分子式：C24H29N5O3  度：99.0%  兔子透明質酸elisa試劑盒   兔子透明質酸試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子透明質酸試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：兔子透明質酸試劑盒、兔子透明質酸eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。小鼠可溶性白介素-2受體   英文名稱：    soluble ierleukin-2 recepor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   sIL-2R  Cardenolide B-1  1318158-89-2  中文名：  分子式：C30H44O8 

小鼠可溶性P選擇素(sP-selectin)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Loxoprofen  68767-14-6  中文名：洛索洛芬  分子式：C15H18O3 

小鼠可溶性P-選擇素(mouse sP-Selectin/sCD62P)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  Ethyl 13-hydroxy-α-linolenate  中文名：  分子式：C20H34O3  度：%

小鼠可溶性L-選擇素   英文名稱：   soluble L-Selectin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   sL-Selectin/sCD62L  Domperidone  57808-66-9  中文名：多潘立酮  分子式：C22H24ClN5O2 

小鼠可溶性E選擇素(sE-selectin)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Ethyl (9Z,11E)-13-hydroxyoctadeca-9,11-dienoate  中文名：  分子式：C20H36O3  度：97.0%

斑石鯛虹彩病毒探針法熒光定量PCR試劑盒廠家Fludarabine  中文名：氟達拉賓  分子式：C10H12FN5O4  度：98.0%  內皮細胞粘附分子 -1(VCAM-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

4-Hydroxythiobenzamide  中文名：  分子式：  度：98.0%  內皮生長因子 (VEGF)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

Clemastine fumarate  中文名：富馬酸氯馬斯汀  分子式：C25H30ClNO5  度：98.0%  內皮生長因子 A(VEGF-A)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  

3-Aminopiperidine dihydrochloride  中文名：  分子式：C5H14Cl2N2  度：98.0%  維生素C（VC）檢測   Vitamin B2 (VB2) detection

Sitagliptin phosphate  中文名：無水磷酸西他列汀  分子式：C16H18F6N5O5P  度：98.0%  維生素B1（VB1）檢測   The total amino acid (TAA) detection

注意事項：

斑石鯛虹彩病毒探針法熒光定量PCR試劑盒廠家1．基礎程序；

2．擴增溫度和延伸溫度；

3．反應時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應液的配制；

6．PCR技術的基本原理；

7．PCR的反應動力學；

8．PCR擴增產物；

9．PCR反應體系與反應條件。點擊了解更公司產品。