PCR實驗方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應進行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務：

簡介：實時熒光定量PCR技術于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉錄成cDNA。

（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結果分析。

（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標準：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f兔色素上皮衍生因子elisa試劑盒   兔色素上皮衍生因子試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔色素上皮衍生因子試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔色素上皮衍生因子試劑盒、兔色素上皮衍生因子 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  5-Benzimidazolecarboxylic acid  15788-16-6  中文名：5-苯并咪唑甲酸  分子式：C8H6N2O2  度：98.0%  關鍵詞： 

兔色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  5-Benzoylpentanoic acid  中文名：5-苯甲酰基戊酸  分子式：C12H14O3  度：98.0%

兔色素上皮衍生因子(PEDF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  5-Azacytidine  320-67-2  中文名：5-氮胞苷  分子式：C8H12N4O5  度：98.0%  關鍵詞： 

兔軟骨糖蛋白39(rabbit YKL-40)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝     5-Chloro-2-nitrobenzoic acid  中文名：  分子式：C7H4ClNO4 

兔軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(rabbit COMP)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  4-Hydroxythiobenzamide  中文名：  分子式：  度：98.0%

Senkyunolide E  中文名：  分子式：C12H12O3  度：%  兔子球蛋白A(IgA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Dihydrosenkyunolide C  中文名：二氫洋川芎內(nèi)酯C  分子式：C12H14O3  度：98.0%  兔子可溶性細胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Glyceryl hexacosanoate  中文名：  分子式：C29H58O4  度：%  兔子可溶性細胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Digalactosyldiacylglycerol  中文名：雙半乳糖二酰甘油  分子式：C49H88O15  度：%  兔子可溶性E選擇素(sE-selectin)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

4-O-(3-nitropropanoyl)corollin  中文名：  分子式：C18H24N4O18  度：%  兔子可溶性血栓調(diào)節(jié)蛋白(sTM)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝小鼠抗抗體(AOAb)ELISA試劑盒   48T/96T   試劑盒   組裝/原裝  Ergosta-4,6,8(14),22-tetraen-3-one  中文名：麥角甾-4,6,8(14),22-四烯-3-酮  分子式：C28H40O  度：96.5%

小鼠抗甲狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  ER-878898  中文名：  分子式：C20H18F2O8S  度：98.0%

小鼠抗甲狀腺過氧化物酶抗體elisa試劑盒   小鼠抗甲狀腺過氧化物酶抗體試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠抗甲狀腺過氧化物酶抗體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠抗甲狀腺過氧化物酶抗體試劑盒、小鼠抗甲狀腺過氧化物酶抗體eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  Ergosta-5,24(28)-diene-3β,7α,16β-triol  中文名：  分子式：C28H46O3 

小鼠抗甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  ER-878898  中文名：  分子式：C20H18F2O8S 

小鼠抗甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Dregeoside Da1  98665-65-7  中文名：  分子式：C42H70O15  度：%  關鍵詞：  南山藤; 孕甾烷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

偽中間型葡萄球菌探針法熒光定量PCR試劑盒圖片Ethyl2-((tert-butoxycarbonyl)amino)-3-nitrobenzoate  136285-65-9  中文名：  分子式：C14H18N2O6  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠抗利尿激素/加壓素/精酸加壓素(ADH/VP/AVP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

Ethyl β-D-xylopyranoside  6743-62-0  中文名：  分子式：C7H14O5  度：97.5%  關鍵詞：    小鼠視黃醇結合蛋白4(RBP-4)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Ethyl β-D-ribo-hex-3-ulopyranoside  104953-08-4  中文名：  分子式：C8H14O6  度：%  關鍵詞：  植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠視黃醇結合蛋白(RBP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Ethyl β-D-fructofuranoside  1820-84-4  中文名：乙基-β-D-呋喃果糖苷  分子式：C8H16O6  度：97.0%  關鍵詞：  中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠生長因子(GH)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Ethyl β-D-apiofuranoside  1932405-61-2  中文名：  分子式：C7H14O5  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠生長抑素(SS)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項：

偽中間型葡萄球菌探針法熒光定量PCR試劑盒圖片1．基礎程序；

2．擴增溫度和延伸溫度；

3．反應時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應液的配制；

6．PCR技術的基本原理；

7．PCR的反應動力學；

8．PCR擴增產(chǎn)物；

9．PCR反應體系與反應條件。點擊了解更公司產(chǎn)品。