服務(wù)流程：

1、根據(jù)客戶提供的基因序列設(shè)計特異性引物和熒光探針（染料法只需設(shè)計引物）

2、抽提DNA、RNA，并對RNA進行逆轉(zhuǎn)錄

3、實時熒光定量PCR

4、提供完整的實驗結(jié)果報告(檢測數(shù)據(jù)、溶解曲線、擴增曲線)

5、返還樣品（引物、RNA和cDNA）

參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：豬痢疾密螺旋體探針法熒光定量PCR試劑盒廠家

英文名稱：Treponema hyodysenteriae

貨號: GOY-M4570

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品運輸：低溫運輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品及特點:

是從土壤農(nóng)桿菌 CP4 菌株中分離得到的抗除草劑草甘膦基因，是轉(zhuǎn)基因植物研究中最為常用的一種篩選標記基因，因此本公司根據(jù)探針法 qPCR 原理開發(fā)了專門用于檢測 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 的試劑盒，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2. 根據(jù) 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 保守區(qū)域設(shè)計引物和探針，能專一性地檢測出樣品中的

鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分，但不能檢測其他非 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 一管式閉管操作，降低了交叉污染。

5. 快速，整個檢測過程（按一個樣品計）所需時間僅為 2.0 小時。

6. 本只能用于科研，足夠 50 次 20uL 體系的探針法熒光定量 PCR。

操作步驟：

下列圖示以Venor Gem OneStep 支原體 常規(guī)PCR 檢測試劑盒 (一步法)，具體產(chǎn)品操作以說明書為準。

第1步：樣本處理：

第2步：試劑制備：

第3步：PCR體系建立：

第4步：啟動PCR反應(yīng)

第5步：電泳結(jié)果分析

191bp為內(nèi)控對照條帶，表明PCR反應(yīng)正常。

當樣本存在支原體污染時，由于內(nèi)控對照與支原體DNA存在競爭，內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ɡ缰гwDNA＞103拷貝）。

陽性對照中支原體DNA＞104拷貝，內(nèi)控對照條帶會完全消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶，此條帶不影響檢測結(jié)果。

如果待測樣本對PCR產(chǎn)生抑制，則內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ê完幮詫φ障啾龋?，此時應(yīng)先進行DNA抽提（推薦使用：Venor Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒），然后再檢測。

實時熒光定量PCR：

實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：

1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性極好，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。

2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。

外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性最好的定量方法，已得到全世界的公認，廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。

β山羊促生長激素釋放激素(GHRH)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  3-Benzyl-5-(2-hydroxyethyl)-4-methylthiazolium chloride  4568-71-2  中文名：3-芐基-5-(2-羥乙基)-4-甲基氯化噻唑鎓  分子式：C13H16ClNOS  度：98.0%   

山羊雌三醇(E3)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  3-Chloro-1-(4-octylphenyl)-1-propanone  928165-59-7  中文名：  分子式：C17H25ClO 

山羊雌二醇(E2)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  3-Benzyl-5-(2-hydroxyethyl)-4-methylthiazolium chloride  中文名：3-芐基-5-(2-羥乙基)-4-甲基氯化噻唑鎓  分子式：C13H16ClNOS  度：98.0%

山羊白介素4elisa試劑盒   山羊白介素4試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   山羊白介素4試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：山羊白介素4試劑盒、山羊白介素4 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  3-Cyclopropylmethoxy-4-difluoromethoxybenzoic acid  中文名：  分子式：C12H12F2O4  度：98.0%

山羊白介素4(IL-4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  3-Benzoylthiazolidine-2-thione  中文名：3-苯甲酰噻唑烷-2-硫酮  分子式：C10H9NOS2  度：98.0%

3β,5α-Dihydroxyergosta-7,22-dien-6-one  中文名：  分子式：C28H44O3  度：97.0%  兔白細胞介素-35（IL-35）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

3β,5α,9α-Trihydroxyergosta-7,22-dien-6-one  中文名：  分子式：C28H44O4  度：97.0%  兔白細胞介素-35（IL-35）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

3β-Hydroxyporiferast-5-en-7-one  中文名：  分子式：C29H48O2  度：%  兔堿性成纖維細胞生長因子   英文名稱：   Rabbit Basic Fibroldast Growth Factor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   BFGF

Stigmast-4-ene-3β,6β-diol  中文名：豆甾-4-烯-3β,6β-二醇  分子式：C29H50O2  度：93.0%  兔2型膠原交聯(lián)C末端肽   英文名稱：   Rabbit C.terminal Telopeptides of type II collagen   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   CTX-2

Stellasterol  中文名：星魚甾醇  分子式：C28H46O  度：96.0%  兔3型膠原   英文名稱：   Rabbit Collagen Type 3   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   C-3小鼠谷酸脫羧酶自身抗體(GAD-Ab)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Deferasirox  201530-41-8  中文名：地拉羅司  分子式：C21H15N3O4 

小鼠谷酸脫羧酶自身抗體(GAD-Ab)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Deflazacort  中文名：地夫可特  分子式：C25H31NO6  度：98.0%

小鼠谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶（GST）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Deferasirox  中文名：地拉羅司  分子式：C21H15N3O4  度：99.0%

小鼠谷胱甘肽過氧化酶（GSH-Px）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Deferasirox  中文名：地拉羅司  分子式：C21H15N3O4 

小鼠谷胱甘肽(GSH)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Deferasirox  201530-41-8  中文名：地拉羅司  分子式：C21H15N3O4  度：99.0%

豬痢疾密螺旋體探針法熒光定量PCR試劑盒廠家Diosgenin  512-04-9  中文名：薯蕷皂苷元  分子式：C27H42O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  抗炎; 雌激素劑; 黃山藥; 螺甾烷; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠17羥孕(17-OHP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

Dioscin  19057-60-4  中文名：薯蕷皂苷  分子式：C45H72O16  度：98.5%  關(guān)鍵詞：  溶血; 細胞毒; 抗真菌; 薯蕷屬; 螺甾烷; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠乳酸脫氫酶   英文名稱：   Mouse Lactate Dehydrogenase   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   LDH

Dinitolmide  148-01-6  中文名：二硝托胺  分子式：C8H7N3O5  度：98.0%      小鼠白三烯C4   英文名稱：   Mouse Leukoiene C4   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   LTC4

Dimetridazole  551-92-8  中文名：二甲硝咪唑  分子式：C4H5N3O2  度：99.0%      小鼠脂蛋白酯酶   英文名稱：   Mouse Lipopeinlipase   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   LPL

Dimethylolurea  140-95-4  中文名：雙羥甲脲  分子式：C3H8N2O3  度：98.0%      小鼠白三烯   英文名稱：   Mouse leukoiene   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   LT3

使用方法：

豬痢疾密螺旋體探針法熒光定量PCR試劑盒廠家一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。

2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個樣品，必須設(shè)置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。

三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進行）

10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。

11. 產(chǎn)品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）