PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度的變化來(lái)對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針?lè)?。通過(guò)對(duì)DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測(cè), 實(shí)現(xiàn)基因的相對(duì)定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡(jiǎn)介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國(guó)Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問(wèn)題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L(zhǎng)基因序列。

（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來(lái)源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f乳酸（lacticacid）測(cè)定試劑盒（測(cè)血清、組織等）（比色法）  Rhein  478-43-3  中文名：大黃酸  分子式：C15H8O6  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

肉毒桿菌(E/F型)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?/span>)   48T                 Withaphysalin A  57423-72-0  中文名：  分子式：C28H34O6 

肉毒桿菌(A/B型)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?/span>)   48T  Withaphysalin A  57423-72-0  中文名：  分子式：C28H34O6  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

溶酶體相關(guān)膜蛋白3   英文名稱：   Human Lysosomal Associated membrane protein 3   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   LAMP3  3-Acetyl-2,5-dichlorothiophene  36157-40-1  中文名：  分子式：C6H4Cl2OS  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)品   Standard for lysozyme                 Ranitidine hydrochloride  66357-59-3  中文名：鹽酸雷尼替丁  分子式：C13H23ClN4O3S

Decoquinate  18507-89-6  中文名：癸氧喹酯  分子式：C24H35NO5    兔兒茶酚胺(CA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Quinocetone  81810-66-4  中文名：喹烯酮  分子式：C18H14N2O3    兔超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Dimetridazole  551-92-8  中文名：二甲硝咪唑  分子式：C4H5N3O2    兔睪(rabbit TESTO)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

Antipyrine  60-80-0  中文名：安替比林  分子式：C11H12N2O    兔抗酸性0酸酶5b(rabbit ACP-5b)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

Tiamulin  55297-95-5  中文名：泰妙菌素  分子式：C28H47NO4S    兔血栓調(diào)節(jié)蛋白(rabbit TM)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝小鼠干擾素 - a (mouse IFN- a )   作用：   ELISA   規(guī)格：   72T   美國(guó) R&D  Ethyl 2-ethoxy-1-[(2'-cyanobiphenyl-4-yl)methyl]-1H-benzimidazole-7-carboxylate  中文名：  分子式：C26H23N3O3 

小鼠肝脂酶elisa試劑盒   小鼠肝脂酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠肝脂酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠肝脂酶試劑盒、小鼠肝脂酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。     Chenodeoxycholic acid  中文名：鵝去氧膽酸  分子式：C24H40O4 

小鼠肝脂酶(HL)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  D-Aspartic acid  中文名：D-天冬氨酸  分子式：C4H7NO4  度：98.0%

小鼠肝脂酶(HL)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Hydrocortisone  50-23-7  中文名：氫化可的松  分子式：C21H30O5 

小鼠肝炎病毒抗體（HV-Ab）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           D-Aspartic acid  中文名：D-天冬氨酸  分子式：C4H7NO4

米氏旋毛蟲探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒廠家Dihydroisotanshinone I  中文名：  分子式：C18H14O3  度：98.0%  兔子Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

4-Hydroxysapriparaquinone  中文名：  分子式：C20H26O4  度：%  兔子Ⅰ型膠原(ColⅠ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Phyllostine  中文名：  分子式：C7H6O4  度：98.5%  兔子Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

2-Methoxystypandrone  中文名：  分子式：C14H12O5  度：98.0%  兔子Ⅰ型膠原(ColⅠ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Lapachol  中文名：拉帕醇  分子式：  度：98.0%  兔子Ⅱ型膠原(ColⅡ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事項(xiàng)：

米氏旋毛蟲探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒廠家1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。