實時熒光定量PCR：

實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：

1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性極好，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。

2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。

外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性最好的定量方法，已得到全世界的公認，廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。

參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：亮熱厲螨探針法熒光定量PCR試劑盒廠家

英文名稱：Tropiladaps clareae

貨號: GOY-M4606

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品運輸：低溫運輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品及特點:

是從土壤農(nóng)桿菌 CP4 菌株中分離得到的抗除草劑草甘膦基因，是轉(zhuǎn)基因植物研究中最為常用的一種篩選標記基因，因此本公司根據(jù)探針法 qPCR 原理開發(fā)了專門用于檢測 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 的試劑盒，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2. 根據(jù) 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 保守區(qū)域設(shè)計引物和探針，能專一性地檢測出樣品中的

鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分，但不能檢測其他非 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 一管式閉管操作，降低了交叉污染。

5. 快速，整個檢測過程（按一個樣品計）所需時間僅為 2.0 小時。

6. 本只能用于科研，足夠 50 次 20uL 體系的探針法熒光定量 PCR。

操作步驟：

下列圖示以Venor Gem OneStep 支原體 常規(guī)PCR 檢測試劑盒 (一步法)，具體產(chǎn)品操作以說明書為準。

第1步：樣本處理：

第2步：試劑制備：

第3步：PCR體系建立：

第4步：啟動PCR反應(yīng)

第5步：電泳結(jié)果分析

191bp為內(nèi)控對照條帶，表明PCR反應(yīng)正常。

當樣本存在支原體污染時，由于內(nèi)控對照與支原體DNA存在競爭，內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ɡ缰гwDNA＞103拷貝）。

陽性對照中支原體DNA＞104拷貝，內(nèi)控對照條帶會完全消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶，此條帶不影響檢測結(jié)果。

如果待測樣本對PCR產(chǎn)生抑制，則內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ê完幮詫φ障啾龋?，此時應(yīng)先進行DNA抽提（推薦使用：Venor Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒），然后再檢測。

使用方法：

一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。

2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個樣品，必須設(shè)置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。

三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進行）

10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。

11. 產(chǎn)品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）

f人脂蛋白脂酶elisa試劑盒   人脂蛋白脂酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人脂蛋白脂酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人脂蛋白脂酶試劑盒、人脂蛋白脂酶elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  2-Benzyl-2-(dimethylamino)-4'-morpholinobutyrophenone  中文名：2-芐基-2-(二甲基氨基)-4'-嗎啉基苯基丁酮  分子式：C23H30N2O2  度：98.0%

人脂蛋白脂酶(LPL)酶聯(lián)吸附測定試劑盒   Human LPL (Lipoprotein Lipase) ELISA Kit  2-Aminophenyl phenyl sulfone  中文名：2-氨基二苯砜  分子式：C12H11NO2S  度：98.0%

人脂蛋白脂酶(LPL)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           2-Benzylsuccinic acid  中文名：  分子式：C11H12O4 

人脂蛋白脂酶(LPL)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  2-Benzyl-2-(dimethylamino)-4'-morpholinobutyrophenone  119313-12-1  中文名：2-芐基-2-(二甲基氨基)-4'-嗎啉基苯基丁酮  分子式：C23H30N2O2  度：98.0%   

人脂蛋白關(guān)聯(lián)0脂酶A2(LpPLA2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒   Human LpPLA2 (Phospholipase A2, Lipoprotein Associated) ELISA Kit  2-Aminothiazol-4-acetic acid  29676-71-9  中文名：2-氨基噻唑-4-乙酸  分子式：C5H6N2O2S

Amitriptyline hydrochloride  549-18-8  中文名：鹽酸阿米替林  分子式：C20H24ClN    0酸化SMAD2/3抗體   英文名稱：   Human Phosphor Mothers Against Decapeaplegic Homolog 2/3 aibody   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   PSMAD2/3 Ab

2-Aminophenyl phenyl sulfone  4273-98-7  中文名：2-氨基二苯砜  分子式：C12H11NO2S    0酸化核因子κB   英文名稱：   Human phosphor-Nuclear Factor kappa B   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   pNFκB

8-Amino-2-naphthalenesulfonic acid  119-28-8  中文名：8-氨基-2-萘磺酸  分子式：C10H9NO3S    羧酸酯酶（CarE）測試盒   可見分光光度法   50管/48樣

2-Amino-5-mercapto-1,3,4-thiadiazole  2349-67-9  中文名：2-氨基-5-巰基-1,3,4-噻二唑  分子式：C2H3N3S2    線粒體呼吸鏈復合體Ⅱ活性測試盒   可見分光光度法   25管/24樣

2-Amino-5-nitrobenzophenone  1775-95-7  中文名：2-氨基-5-硝基二苯甲酮  分子式：C13H10N2O3    線粒體呼吸鏈復合體Ⅲ活性測試盒   可見分光光度法   25管/24樣小鼠促上腺皮質(zhì)激素   英文名稱：   Adrenocor Ticoopic Hormore   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ACTH  Methyl 2-bromomethyl-3-nitrobenzoate  98475-07-1  中文名：  分子式：Methyl 2-bromomethyl-3-nitrobenzoate  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

小鼠促上皮質(zhì)激素釋放激素elisa試劑盒   小鼠促上皮質(zhì)激素釋放激素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠促上皮質(zhì)激素釋放激素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠促上皮質(zhì)激素釋放激素試劑盒、小鼠促上皮質(zhì)激素釋放激素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。     Epigoitrin  1072-93-1  中文名：表告依春  分子式：C5H7NOS 

小鼠促上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  N6-Benzoyladenine  4005-49-6  中文名：N6-苯甲酰基腺嘌呤  分子式：C12H9N5O  度：98.0%   

小鼠促卵泡素elisa試劑盒   小鼠促卵泡素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠促卵泡素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠促卵泡素試劑盒、小鼠促卵泡素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  Cyasterone  中文名：杯莧甾酮  分子式：C29H44O8  度：99.0%

小鼠促卵泡素(mouse FSH)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  Fludarabine  21679-14-1  中文名：氟達拉賓  分子式：C10H12FN5O4  度：98.0%  關(guān)鍵詞：

亮熱厲螨探針法熒光定量PCR試劑盒廠家Daturataturin A aglycone  904665-71-0  中文名：  分子式：C28H38O5    組織PKCε激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

6-Hydroxystigmasta-4,22-dien-3-one  36450-01-8  中文名：  分子式：C29H46O2    humanParathyroidhormone,PTHELISAKit人甲狀旁腺激素(PTH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Oleandrin  465-16-7  中文名：  分子式：C32H48O9    兔子基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

β-Anhydrouzarigenin  3080-20-4  中文名：  分子式：C23H32O3    Human thymus independe aigen (TI-Ag) ELISA Kit 人胸腺非依賴性抗原(TI-Ag)ELISA試劑盒

Tenacigenin B  80508-42-5  中文名：  分子式：C21H32O5    Humanai-cenolandcenosomeaibody,ACAELISAKit 人抗中性粒/中心體抗體(ACA)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

服務(wù)流程：

亮熱厲螨探針法熒光定量PCR試劑盒廠家1、根據(jù)客戶提供的基因序列設(shè)計特異性引物和熒光探針（染料法只需設(shè)計引物）

2、抽提DNA、RNA，并對RNA進行逆轉(zhuǎn)錄

3、實時熒光定量PCR

4、提供完整的實驗結(jié)果報告(檢測數(shù)據(jù)、溶解曲線、擴增曲線)

5、返還樣品（引物、RNA和cDNA）