PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度的變化來(lái)對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針?lè)āＭㄟ^(guò)對(duì)DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測(cè), 實(shí)現(xiàn)基因的相對(duì)定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡(jiǎn)介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國(guó)Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問(wèn)題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L(zhǎng)基因序列。

（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來(lái)源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f人乙脫氫酶elisa試劑盒   人乙脫氫酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人乙脫氫酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人乙脫氫酶試劑盒、人乙脫氫酶elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  3-(Bromomethyl)-2-cyclopropyl-4-(4'-fluorophenyl)quinoline  154057-56-4  中文名：  分子式：C19H15BrFN 

人胰島素原(PI)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Tiamulin  55297-95-5  中文名：泰妙菌素  分子式：C28H47NO4S  度：98.0%   

人胰島素受體β(ISR-β)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Tiamulin  55297-95-5  中文名：泰妙菌素  分子式：C28H47NO4S 

人氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Timosaponin AIII  41059-79-4  中文名：知母皂苷AIII  分子式：C39H64O13 

人血小板生成素(TPO)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒   Human TPO (Thrombopoietin) ELISA Kit  2-Naphthyl N-benzoylphenylalaninate  15873-25-3  中文名：2-萘基N-苯甲?；奖彼狨?/span>  分子式：C26H21NO3

N4-Benzoylcytosine  26661-13-2  中文名：N4-苯甲?；奏?/span>  分子式：C11H9N3O2    DPD臭氧測(cè)定試劑盒   DPD ozone reage kit

Benzyl 2,4-dihydroxyphenyl ketone  3669-41-8  中文名：2,4-二羥基苯基芐酮  分子式：C14H12O3    臭氧快速試劑盒   Ozone rapid reage kit

5-Benzyl N-(tert-butoxycarbonyl)-L-glutamate  13574-13-5  中文名：N-(叔丁氧羰基)-L-谷氨酸-5-芐酯  分子式：C17H23NO6    DPD余測(cè)定試劑盒   DPD residual  test kit              

N6-Benzyladenine  1214-39-7  中文名：N6-芐基腺嘌呤  分子式：C12H11N5    水樣中離子（Hg2+）濃度測(cè)試盒   可見(jiàn)分光光度法   50管/48樣

Benzidamine hydrochloride  132-69-4  中文名：鹽酸芐達(dá)明  分子式：C19H24ClN3O    水樣中六價(jià)鉻離子（Cr6+）濃度測(cè)試盒   可見(jiàn)分光光度法   50管/48樣小鼠超氧化物歧化酶(SOD)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Gracillin  19083-00-2  中文名：纖細(xì)薯蕷皂苷  分子式：C45H72O17  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  心; 抗腫瘤; 抗真菌; 薯蕷屬; 螺甾烷; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)

小鼠超氧化物歧化酶(mouse SOD)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Methenolone acetate  中文名：美替諾龍醋酸酯  分子式：C22H32O3  

小鼠超氧化物歧化酶   英文名稱：   Mouse Superoxide Dismase   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   SOD  Clerosterol glucoside  中文名：赤桐甾醇葡萄糖苷  分子式：C35H58O6 

小鼠超敏感度促甲狀腺素   英文名稱：   Mouse ulasensitive Thyroid Stimulating Hormone   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   U.TSH  Fluoronaphthalene  中文名：  分子式：C10H7F 

小鼠超敏C反應(yīng)蛋白elisa試劑盒   小鼠超敏C反應(yīng)蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠超敏C反應(yīng)蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠超敏C反應(yīng)蛋白試劑盒、小鼠超敏C反應(yīng)蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  cis-Octahydro-isoindole  21850-12-4  中文名：  分子式：C8H15N

伊氏錐蟲(chóng)探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒運(yùn)輸Damnacanthal  477-84-9  中文名：虎刺醛  分子式：C16H10O5    組織NEK2激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

Xanthorin  17526-15-7  中文名：  分子式：C16H12O6    Humanphosphoenolpyruvatecarboxykinase,PCKELISAKit人0酸烯醇式同酸羧激酶(PCK)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

2-Hydroxy-3-methylanthraquinone  17241-40-6  中文名：  分子式：C15H10O3    兔子凝血酶(TM)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Citreorosein  481-73-2  中文名：ω-羥基大黃素  分子式：C15H10O6    Human adenylyl cyclase 1 (AC-1) ELISA Kit 人腺苷酸環(huán)化酶1(AC-1)ELISA試劑盒

Emodin  518-82-1  中文名：大黃素  分子式：C15H10O5    Humanimmunoglubinjoiningchain,Ig-jELISAKit 人球蛋白j鏈(Ig-j)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

注意事項(xiàng)：

伊氏錐蟲(chóng)探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒運(yùn)輸1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。