凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

參數(shù)規(guī)格：
小鼠食管上皮細(xì)胞【MouseEsophagus:NormalEsophagealEpithelialCells】
產(chǎn)品描述：食管被一層線性排列的、無角化、潮濕的復(fù)層扁平上皮細(xì)胞覆蓋。其頂端細(xì)胞膜和細(xì)胞間連接復(fù)合體聯(lián)合在一起產(chǎn)生有效滲透屏障，防止食管內(nèi)容物的滲入。特別的是，層屏障使表層細(xì)胞的基質(zhì)外側(cè)細(xì)胞膜和深層細(xì)胞的全部細(xì)胞膜不暴露于食管腔內(nèi)規(guī)律的大幅波動(dòng)的滲透壓之下。從組織學(xué)上講，食管上皮細(xì)胞由兩層組成，基底層和分化層。僅基底層的細(xì)胞可以增殖，然后向食管腔移行。移行過程伴隨有分化的發(fā)生和分化標(biāo)記的依序表達(dá)。食管上皮培養(yǎng)是研究食管上皮細(xì)胞生理和食管癌變機(jī)制的非常好的體外模型。公司提供的小鼠食管上皮細(xì)胞，均來自新鮮組織。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司專利產(chǎn)品小鼠食管上皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒(MouseEsophagusPrimaCell:NormalEsophagealEpithelialCellsCatNo.3-4127)來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞（如脂肪細(xì)胞、纖維細(xì)胞等）的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，小鼠食管上皮細(xì)胞可以保持原代細(xì)胞的分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明 ：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕； 
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率； 
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
培養(yǎng)操作:
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
人纖維肉瘤細(xì)胞;HT-1080L-環(huán)丙基丙氨酸質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRL-Cyclopropylalanine

豚鼠皮膚細(xì)胞;GP-S3 非洲綠猴腎細(xì)胞，CV-1細(xì)胞 SMC細(xì)胞，兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞L-高苯丙氨酸質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRL-Homophenylalanine

人浸潤性導(dǎo)管癌旁皮膚細(xì)胞;CCD-1095Sk紫杉醇質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR,用于細(xì)胞培養(yǎng),藥劑造模Paclitaxel

PVRL1 Others Human 人 PVRL1 / HVEC / CD111 / Nectin-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 紫杉醇（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Paclitaxel

大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞鹽酸帕洛諾司瓊質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)Palonosetron HCl
人皮膚肥大細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL嗎替麥考酚酯-d4Mycophenolate Mofetil-d4

ψ2細(xì)胞，小鼠胚成纖維包裝細(xì)胞 Jecket(瘤細(xì)胞) 大鼠肺細(xì)胞;WL1甲基麥考酚酯(環(huán)氧樹脂雜質(zhì)E)Methyl Mycophenolate (EP Impurity E)

EFNA5 Protein Rat 重組大鼠 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白 (His 標(biāo)簽)嗎替甲基麥考酚酯N-氧基(環(huán)氧樹脂雜質(zhì)G)Mycophenolate Mofetil N-Oxide (EP Impurity G)

A-498(人腎癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠單核巨噬細(xì)胞;J774A.1奈替米星Netilmicin

人牙齦成纖維細(xì)胞總RNAHGF NA制霉菌素Nystatin
CL-0295MV3(人色素瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2TBE,10XLIQUIDCONCENTRATETBE 10X濃縮液超級透明無色液體RTsigma

人侵襲性脈絡(luò)膜色素瘤細(xì)胞;MuM-2B 大鼠皮下脂肪細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL酸性茜素藍(lán)B Acid alizarin blue B 1058-92-0 25G 通用試劑

LM-8 小鼠骨肉瘤甘安酰-L-亮安酰-L-酪安醋 H-GLY-LqU-TYR-OH 4306/4/2

WFDC2 Others Human 人 WFDC2 / HE4 / WAP5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) Lumbokinaseepwules蚯蚓酶/蚓激酶100克高，4000u/mg

人脾臟成纖維細(xì)胞HSF6131-99-3二甲鈉wo7ium cacodylate trihydrate
小鼠食管上皮細(xì)胞RELT Others Human 人 RELT / TNFRSF19L 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 酚紅shēng huà shì jì容量：25克

CM-R005大鼠氣管平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL維拉帕米鹽酸鹽 (±)-Verapamil hydrochloride,≥99% 152-11-4 1G 通用試劑

IL22RA1 Others Canine 狗 IL22RA1 / IL22R 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 三基硅醇 ≥98.5% (GC) xy7noxytrimqthylsilcnq 1066-40-6

人主動(dòng)脈成纖維細(xì)胞HAF200ul吸頭shēng huà shì jì容量：保存：-20℃25u

3T3-L1細(xì)胞，小鼠脂肪細(xì)胞 人癌細(xì)胞,MCF-7(NEW)細(xì)胞 大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞RA1-;正基1-Iodopropane;n-Propyl iodide;1-Iodo-n-propane
收到小鼠食管上皮細(xì)胞如何處理？
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。

公司提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織，公司提供的小鼠源原代細(xì)胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。